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* * * * * * * * * * 第九章 色谱法概论 Chromatograph analysis * 内容： 第一节 色谱法的起源、特点及分类 generalization of chromatograph analysis 第二节 色谱过程及术语 fundamental of chromatograph theory 重点 第三节 薄层色谱法 Thin layer chromatography 一、 色谱法的起源、特点及分类 混合物最有效的分离、分析方法。 色谱法是一种分离技术。 利用各物质在两相中具有不同的分配系数，当两相作相对运动时，这些物质在两相中进行多次反复的分配来达到分离的目的。 实现色谱操作的基本条件是必须具备相对运动的两相：固定相、流动相。 试样混合物的分离过程也就是试样中各组分在色谱分离柱中的两相间不断进行着的分配过程。 1. 起源 * 色谱原型装置：俄国植物学家茨维特在1906年使用的装置 扑热息痛、对乙酰氨基酚 咖啡因 乙水杨胺 * 2.色谱法分类 按流动相和固定相的状态分类： (1)气相色谱：流动相为气体（称为载气）。 按固定相的不同又分为：气固色谱和气液色谱 * 冰片对照品的GC * (2)液相色谱：流动相为液体（也称为洗脱液）。 按固定相的不同分为：液固色谱和液液色谱。 （3）超临界色谱: CO2流动相。 * 1果糖 2葡萄糖 3蔗糖 4麦芽糖 5乳糖 * 按分离原理分类 吸附色谱：根据不同组分在吸附剂上的吸附和解吸能力的大小而分离。 分配色谱：根据不同组分在固定液和流动液中溶解度的大小而分离。 离子交换色谱：不同组分对离子交换树脂的亲和力不同。 液相色谱的一种，以特制的离子交换树脂为固定相，不同pH值的水溶液为流动相。 凝胶色谱：依据分子几何尺寸大小不同进行分离。 测聚合物分子量分布。 * 按固定相的形式分类 柱色谱： 填充柱色谱、毛细管色谱 平板色谱： 纸色谱、薄层色谱 * 冰片的TLC * * 3.色谱法的特点 （1）分离效率高 复杂混合物，有机同系物、异构体。手性异构体。 （2） 灵敏度高 可以检测出μg.g-1(10-6)级甚至ng.g-1(10-9)级的物质量。 （3） 分析速度快 一般在几分钟或几十分钟内可以完成一个试样的分析。 （4） 应用范围广 气相色谱：沸点低于400℃的各种有机或无机试样的分析。 液相色谱：高沸点、热不稳定、生物试样的分离分析。 二、色谱过程及术语 当流动相中携带的混合物流经固定相时，其与固定相发生相互作用。由于混合物中各组分在性质和结构上的差异，与固定相之间产生的作用力的大小、强弱不同，随着流动相的移动，混合物在两相间经过反复多次的分配平衡，使得各组分被固定相保留的时间不同，从而按一定次序由固定相中流出。与适当的柱后检测方法结合，实现混合物中各组分的分离与检测。 色谱过程是物质在相对运动着的两相间分配平衡的过程。 * 1. 色谱分离过程 当试样由载气携带进入色谱柱与固定相接触时，被固定相溶解或吸附; 随着载气的不断通入，被溶解或吸附的组分又从固定相中挥发或脱附; 挥发或脱附下的组分随着载气向前移动时又再次被固定相溶解或吸附; 随着载气的流动，溶解、挥发，或吸附、脱附的过程反复地进行。 2、色谱流出曲线与术语 * 1.基线 在操作条件下，没有组分流出时的流出曲线。 2. 峰高（h） 3. 区域宽度 色谱峰宽度有三种表示方法： (1)标准偏差(?)： (2)半峰宽(W1/2)：W1/2 =2.355? (3)峰宽(Wb)：Wb=4 ? =1.699W1/2 4. 拖尾因子(对称因子) T= = T应在0.95-1.05之间，对称峰。 5.保留值 （1）时间表示的保留值 死时间tM：不被固定相吸附或溶解的组分，从进样开始到出现峰极大值所需时间。流动相平均线速u=L/tM 保留时间（tR）：组分从进样到柱后出现浓度极大值时所需的时间； 调整保留时间t′R： t′R=tR-tM （2）体积表示的保留值 死体积（VM）：内部体积的总和。VM = tM×FC Fc：流动相的体积流速(ml/min)。 保留体积（VR）：进样开始到被测物质在柱后出现浓度极大值所通过的流动相体积。VR = tR×Fc 调整保留体积(V＇R)： V＇ R = VR －VM = t′R Fc （3） 相对保留值r21 组分2与组分1相对保留值之比： r21 = t′R2 / t′R1=