Keap1Nrf2启动子区甲基化及其对Nrf2下游抗氧化基因转录调控在燃煤型砷中毒的作用Methylation of the promoter region of Keap1Nrf2 and its effect on the transcription regulation of antioxidant genes in the downstream of Nrf2 in coal-fired arsenism.pdfVIP

《中国图书资料分类法》分类号：R114 单位代码：10660 学 号：S110131 贵阳医学院 2011 届硕士学位论文 Keap1/Nrf2 启动子区甲基化及其对Nrf2 下 游抗氧化基因转录调控在燃煤型砷中毒的 作用 研 究 生： 郑雯琳 导 师： 张爱华 教授 年 级： 2011 级 专 业： 卫生毒理学 2014 年 4 月 16 日 Keap1/Nrf2 启动子区甲基化及其对Nrf2 下游抗氧化基因转录调控在 燃煤型砷中毒的作用 摘要：目的：研究燃煤污染型砷中毒抗氧化通路Keap1-Nrf2-ARE 中Keap1、Nrf2 基因甲基化状态及Nrf2 调控的抗氧化基因GCLC、GCLM 的mRNA 表达情况，探讨 其在燃煤型砷中毒中的作用。方法：采用，甲基化特异的PCR 法(MSP)检测砷暴 露观察对象和正常对象外周血中Keap1、Nrf2 启动子区甲基化状态，采用qReal timePCR 检测GCLC、GCLM mRNA 转录水平，并进行分析。结果：1.Keap1 甲基化 结果：①阳性PCR 产物为 132bp;②砷暴露组甲基化阳性率为22.7% （47/207）。 正常对照组甲基化阳性率为 0.016(1/64) ，暴露组明显高于正常对照组 （P0.05）。③病区非病人组甲基化阳性率为 4.3% （2/46）；轻度砷中毒组甲基 化阳性率为15.3%(7/46)；中度砷中毒甲基化阳性率为28.3%(17/60)；重度砷中 毒组甲基化阳性率为 38.2%(21/55)。砷暴露组Keap1 甲基化阳性率明显高于正 常对照组；且随着砷中毒程度的加深，暴露组甲基化阳性率出现逐渐增高的趋势。 2.Nrf2 甲基化结果：①阳性 PCR 产物为 148bp;②暴露组甲基化阳性率为 1.9%(4/207),正常对照组甲基化阳性率为 0(0/64),正常对照砷暴露观察对象 Nrf2 基因的甲基化发生率差异无统计学意义。③病区非病人组甲基化阳性率为 0(0/46)；轻度砷中毒组甲基化阳性率为2.2%(1/46)；中度砷中毒甲基化阳性率 为3.3%(2/60)；重度砷中毒组甲基化阳性率为1.8%(1/55)。经统计学分析：正 常对照与病区非病人以及轻、中、重度砷中毒患者Nrf2 基因的甲基化发生率差 异均无统计学意义。3.GCLC、GCLM mRNA 表达结果：暴露组基因表达水平明显高 于正常对照组.结论：砷暴露可能导致 Keap1 基因启动子区高甲基化，Keap1 甲 基化可能是抑制其 mRNA 表达的主要原因之一。砷可能通过下调 Keap1 和上调 Nrf2 表达，调控GCLC、GCLM 的表达。 Abstract:Objective：To investigate the methylation status of Keap and Nrf2 gene of antioxidant pathways Keap1-Nrf2-ARE and to investigate mRNA expression of antioxidant genes GCLC and GCLM which regulated by Nrf2 in coal polluting arsenic poisoning disease，explore its role in the coal type of arsenic poisoning disease.Methods: To use the method of methylation specific PCR (MSP) to detect the promoter region methylation status in blood of arsenic exposure observation object and normal peripheral,to adopt qReal timePCR to investigate expression of