《中药鉴定学》实验指导.doc

全国中医药高职高专教材 《中药鉴定学》实验指导 实验一 显微镜的使用和组织制片 【实验时数】2学时 【实验地点】中药鉴定学实验室 【实验器具准备】显微镜、培养皿、毛笔、刀片等；稀甘油、甘油醋酸试液、水合氯醛试液。 【实验要求】掌握显微镜的使用方法，掌握徒手制片的制作和永久制片的制作过程，注意事项 【实验内容】熟练显微镜的使用，采用徒手切片法。 徒手切片法主要用于临时制片，制片迅速，更为重要的是制片过程中没有复杂的化学处理，可以观察到植物的天然色彩，真实地反映植物细胞组织的本来面目，也利于显微化学的观察，因而必须熟练掌握。 1、? （1）热水浸泡法：材料置600C温水浸泡数小时。本法适用于纤细的根茎、根、全草、叶、花等质软而细薄的材料。 （2）水煮法：材料置沸水中煮一段时间，软后取出。本法适用于软质的根、根茎、茎木、皮类等材料。 2、? （1）手持法：先将材料断面削平，用左手拇指和食指夹住材料下端，用中指或无名指托住，使材料高出拇指和食指，并注意食指应略高于拇指以防切片。然后用右手平拿刀片，刀口向内，并与材料的断面平行，切时应用臂力以轻微均匀的动作向后拉切，不得断续，更不得来回拉力，切片以薄而透明，组织、细胞形态清晰者为好。 （2）夹持法：取夹持物切成适当大小，纵向剖开一定深度，将材料夹入按手持拉切，切下的片子放入培养皿中即可。 （3）压切法：将材料放于切片板上，左手中指及食指轻轻压住材料，右手持刀自左向右或自上而下切削，切片用毛笔挑入培养皿中备用。此法刀刃易伤，应避免刀刃与板接触。此法对于细小果实种子类或某些较硬的材料效果比前二法要佳。 3、不染色装片 ??? 用毛笔挑取或用镊子轻取透明的薄片放于载玻片中央，直接观察或用水合氯醛透化后加封芷剂盖上盖玻片即可。 4、染色装片 （1）番红染色：将手切的薄片移入置番红水溶液或酒精中进行染色，番红染色2～24小时，酒精溶液染色1～24小时。 （2）冲洗：染色后用水或5%酒精冲洗，除去多余的番红色水。 （3）脱水：用30%、50%、70%、80%不同浓度的酒精依次各浸约5分钟，以逐渐脱除组织细胞内的水分。如果番红染色是用酒精液，则可自5%酒精开始脱水。 （4）龙胆紫二重染色：将脱水至80%酒精溶液的切片用龙胆紫酒精溶液染1～5分钟可使纤维素细胞壁呈紫色，如龙胆紫染色适宜即可，用80%酒精浸洗后，用90%及无水酒精（二次）各2分钟以脱去材料中全部水分。 ??? 在二重染色后，如紫色太深可用盐酸酒精溶液作褪色剂（100ml）的70%～80%酒精中加1～2滴盐酸放置数刻至紫色适宜为止，用70%～80%酒精洗数次以除去盐酸。 (5)透明：材料脱水后浸入50%甲苯（即等重的二甲苯与无水乙醇）5～10秒及纯二甲苯10秒使细胞组织透明，便于观察与封芷。 （6）封芷：将材料移入载玻片上，取加拿大香脂1～2滴于材料上加盖玻片即可长久保存。 （7）标签：写明材料名称及制作日期等。 （二）表面制片法 ??? 表面制片通常属整体封固法的一类，它是将叶的表皮、花冠、果实、种子的外表皮、草质茎的表皮等采取不同的方法取下经过处理而制成的玻片标本。 1、材料的预处理 ??? 新鲜材料可用剪刀剪下所需部位，用清水冲洗，处理成适当大小备用。若干药材叶可先用冷水浸，再用温水浸到能恢复原样即可，若是较硬的材料（果实、种子）还需经过软化处理。 2、方法 （1）撕取法，一般用于表皮易于剥离的表皮制片，取材料分清上、下表皮用刀片在表面轻划一刀或等分折叠后，用镊子在刀痕处或折痕处取表皮，撕得的表皮置载玻片中央，表皮的外表面朝上，除去带绿色部分的表皮，加稀甘油封片即可。 （2）剥取法 （3）解离法 （4）整体透化封固法 （三）操作徒手制片 （四）总结学生操作过程的 优缺点 （五）作业 写出永久制片的制作全过程 徒手切制大黄制片 实验二 绘图技巧和方法 【实验时数】2学时 【实验地点】中药鉴定学实验室 【实验器具准备】显微镜、培养皿；稀甘油、甘油醋酸试液、水合氯醛试液。 【实验要求】掌握组织结构详图和简图的绘图技巧和描述语言 【实验内容方法】 (1)徒手绘图法：选择典型的标本结构仔细观察各部位的形状、结构及比例关系用色淡的铅笔(2H或4H)，按照显微图象的比例关系画出轮廓草图，经反复对照修改后，再用色深的铅笔(HB或2B)绘出修改图。 组织简图各部位表示符号  绘图步骤：①将组织标本片置于显微镜下观察，用铅笔将图象的各部位轮廓画出将各部位依次向右方引出直线，标上图注图下注明各部分名称及放大倍数。 (3)组织详图绘制法：将显微镜下观察的组织、细胞及其内含物的真实形态、大小等特征，如实的绘制到画面上的图形，称为组织详图。绘图步骤同简图