《动物细胞培养》课件.pptVIP

* * 动物细胞培养、 动物细胞核移植、 动物细胞融合、 单克隆抗体 复习提问： 植物细胞工程常用的技术手段有哪些？ 植物组织培养、 植物体细胞杂交 动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础。 动物细胞工程常用的技术手段有哪些？ 阅读了解： 动物细胞培养就是从动物机体内取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。 2、过程： ☆ 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官，它们细胞增殖能力强，分裂旺盛，分化程度低，容易培养。 1、概念： 一、动物细胞培养 （1）取材 在进行动物细胞培养时，用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是蛋白质。动物细胞培养适宜的PH为7.2—7.4，此环境下胃蛋白酶（2.0）没有活性，而胰蛋白酶(7.2-8.4)的活性较高。 （2）分散成单个细胞 （3）制成悬液，贴壁生长 （1）细胞贴壁： 悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。 要求： 培养瓶或培养皿内表面光滑、无毒、易于贴附。 （2）接触抑制： 当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，称为细胞的接触抑制。 3、特点： 动物细胞过程： 什么是原代培养和传代培养；细胞株和细胞系？ 细胞悬浮液 10代细胞 50代细胞 无限传代 原代培养 传代培养 细胞株 细胞系 多数组织细胞固定在表面生长和分裂。 随细胞增多，细胞就会停止分裂增殖 遗传物质改变 无菌、无毒的环境 培养液和所有培养用具进行无菌处理 措施：培养液中加抗生素，定期更换培养液 营养 糖、氨基酸、无机盐、微量元素、促生长因子（维生素、激素等）和动物血清 温度和PH 36.5±0.5℃ 7.2-7.4 气体环境 O2 CO2 95％空气 5％的CO2 4、动物细胞培养的条件： 原代培养：从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞。培养的第1代细胞与传10代以内的细胞称为原代细胞培养。 传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。 细胞株：原代细胞一般传至10代左右细胞生长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞存活到40~50代，这种传代细胞为细胞株。 细胞系：细胞株传代至50代后又出现细胞生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的改变，使其在培养条件下可以无限制传代，这种传代细胞为细胞系。 细胞株和细胞系的区别： 细胞系的遗传物质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，容易传代培养。 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 胰蛋白酶 剪碎 单个细胞 加培养液 制成 细胞悬浮液 细胞株 细胞系 无限传代 去掉组织间蛋白 动物细胞培养不能 最终培养成生物体 实质是细胞增殖 细胞的全能性 细胞株、细胞系 植物体 培养结果 获得细胞或细胞产物 快速繁殖、培育无病毒植株等 培养目的 葡萄糖、动物血清 蔗糖、植物激素 培养基特有成分 液体培养基 固体培养基 培养基性质 细胞增殖 原理 动物细胞培养 植物组织培养 比较项目 植物细胞和动物细胞培养的比较 共点：离休、无菌、营养物质、外界条件 （1）大规模培养生产生物制品（病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体） （2）作为基因工程中的受体细胞 （3）培养的动物细胞可以用于检测有毒物质，判断某种物质的毒性 （4）为治疗和预防癌症及其他疾病提供理论依据 5、动物细胞培养技术的应用： 思考： 2、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料？ 1、动物细胞培养液的主要成分是什么？较植物组织培养基有何独特之处？ 3、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？ 4、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？ 主要成分：葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。独特之处有：1、液体培养基 2、成分中有动物血清等 因为这些组织或器官上的细胞生命力旺盛，分裂能力强 成块组织不利培养，分散了做成细胞悬浮液利于培养 不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能发育成新的动物个体 将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育成动物个体。 用核移植的方法得到的动物称为克隆动物 受体细胞：MⅡ期的卵母细胞 二、动物体细胞核移植和克隆动物 1、概念： 2、类型： 胚胎细胞核移植 体细胞核移植（难度高） 黑面绵羊去核卵母细胞 白面绵羊乳腺细胞核 细胞核移植 重组细胞 电脉冲刺激 早期胚胎 胚胎移植 另一头绵羊的子宫 妊娠、出生 克隆羊多利 3、体细胞核移植过程 克隆羊培育过程 （MⅡ卵母细胞） 减数第二次分裂中期 去核的卵母细胞 供体细胞注入去核卵母细胞 受体细胞激活，完成减数分裂、发育 胚胎移植 代孕母牛 克隆牛 4