一步一步教你读流式图：凋亡和坏死的区别.doc

一步一步教你读流式图：凋亡和坏死的区别 2008-08-05 00:00 ? 来源：丁香园 ? 点击次数： 841 关键词： 流式图 调亡 坏死 区别 分享到： 收藏夹 腾讯微博 新浪微博 开心网 下图为坏死图。坏死的位于G0/G1峰前的峰形为从左至右的反抛物线形。如下： 而APOptosis则是一个较为对称的峰。如下：. 而有时凋亡和坏死同时存在。如下图：蓝色的为apo峰（第一个三角），而白色的为坏死峰。第二个三角为G0/G1峰。第三个为异倍体G0/G1峰。 实际上，很多时候我们诱导的凋亡峰不像上图那样明显，如下： 原因要从实验的原理开始，到细胞状态，实验步骤，试剂效能等，一一分析。例如，某因素诱导的凋亡需要较长时间，而我们培养时间还没到，就有可能不出凋亡峰；或是在早期凋亡是用PI染色做SUB-G1，凋亡率会不高，而用API法则更好地测出其凋亡率。 编辑： famsking 一步一步教你读流式图：凋亡诱导 2008-08-05 00:00 ? 来源：丁香园 ? 点击次数： 978 关键词： 流式图 教程 调亡诱导 分享到： 收藏夹 腾讯微博 新浪微博 开心网 先发一张关于PI染色的uv诱导凋亡的图片，这是con： ? 这是诱导凋亡的流式图，我们称之为sampl： 那么怎么看这两张图呢？ 首先，我们要知道各个参数的意义。这在流式原理中有介绍。 然后，我们要知道各个图之间的联系。大家看一下下面的图。 R1主要代表粘连细胞 R2主要代表G2/M期细胞 R3主要代表G0/G1期细胞 R4主要代表s期细胞 R5主要代表凋亡细胞 “主要”是因为大家可以看到设的gate后各个gate中的细胞有位置重叠。 FL2-W/FL2-A和FL2-A/COUNT之间的关系。 这两张图的最大区别在于G0/G1期前面的亚G1峰。这个峰就是FL2-W/FL2-A图上的左下方的“小尾巴”，小尾巴越大，SUB-G1峰就越高。也就是说凋亡的越多。当然这需要跟整张图比较，就是选取mark后测量其gate%。 编辑： famsking 一步一步教你读流式图：表型CD4CD8 2008-08-05 00:00 ? 来源：丁香园 ? 点击次数： 927 关键词： 表型CD4CD8 流式图 教程 分享到： 收藏夹 腾讯微博 新浪微博 开心网 大鼠外周血T细胞CD亚群CD4/CD8比值所做的流式分析图  ? 右上角的图片是CD4和CD8的双荧光检测。右下象限是CD8单阳性，左上是CD4单阳，右上为二者双阳，左下为双阴。比例如图。 剩下的二图为CD4、CD8直方图。实际上用刚才的双标也可以看出比例来。 R1为淋巴细胞群体，是您的目的细胞群体，针对这一群细胞进行分析！ 一步一步教你读流式图：sub-G1凋亡图 2008-08-05 00:00 ? 来源：丁香园 ? 点击次数： 1851 关键词： 流式图 sub-G1凋亡图 教程 分享到： 收藏夹 腾讯微博 新浪微博 开心网 凋亡都比较多，但遗憾的是与G1峰分得不是很开，因此，Modfit分析的时候，会根据结果用统计学原理将它们分为Apo和G1，但这样可能掩盖真正的结果！建议做PI染色的时候，在PBS洗两次后，加入PC buffer，这是一种轻破膜剂，可以使断裂成小片断的DNA出细胞而降低其在FL2-Ad上的值，这样就容易区分G1和APO了。 凋亡诱导，左边为对照，右边为凋亡组 ? ? 对照很好，cv值不错，凋亡率控制得也不错！凋亡非常明显，而且峰也很漂亮。唯一的美中不足就是凋亡峰的位移稍低，如能用PC buffer 轻破膜，效果将更漂亮！请查阅cnki中关于Sub-G1法测凋亡的关于PC buffer的使用方法（作者：龚建平 关键字：Sub-G1查），将对实验有很大帮助！ 细胞周期分析,modifit ,不知凋亡细胞为什么没和G1期分开?右图为对照，左图实验组 作者用的是muticycle，所以不太能确定。但是不管是哪家的软件，都是按一定的数学模型（公式）结合数据进行模拟，所以在数据分布不够典型的时候是会产生很大误差的。就像你的结果，我根据经验判断是modfit强行进行subG1计算，其实算进去的基本上都不是凋亡细胞，但是它没有模糊概念，生硬地套用了subG1的模拟方程，所以才有“subG1”的出现。如果你对sample只进行one cycle模拟，结果会不一样的。建议，除非subG1和G1分隔干净利落，否则不要随便应用cycle软件进行模拟，否则大部分结果是错误的，cycle软件本质上说适合作周期分析，作AP分析有较为严格的限制。直接拉水平门就可以了。