双孢蘑菇种质SSR分子身份证的构建-论文.pdfVIP

食用菌学报@2016．23(2)：6～11 DoI：10．16488／j．cnki．1005—9873．2016．02．002 双孢蘑菇种质SSR分子身份证的构建 王新新，李丹，宋 冰，郭玉秀，苏文英，戴月婷，刘 源，付永平，李 玉‘ (吉林农业大学食药用菌教育部工程研究中心，吉林长春130118) 摘要：分子身份证是作物品种数字化的DNA指纹。本文采用从100对ssR引物中筛选出的8对引物、对 从国内外收集的80份栽培及野生双孢蘑菇(A弘rfcHs6f印Dr“s)种质的扩增谱进行分析，合并同类型菌株后得 到29份代表菌株，再根据不同代表菌株对8对SSR引物产生的不同扩增谱型构建出这29份不同双孢菇菌株 的分子身份证，可为区分和鉴别双孢蘑菇的品种提供参考。 关键词：双孢蘑菇；SSR标记；分子身份证 双孢蘑菇(4妒一c“s 始栽培，是世界现今人工栽培范围最广、产量最大的食用菌之一[2]。双孢蘑菇的商业化、规模化栽培模 式近几年在国内发展地更加迅速，我国双孢蘑菇产量和出口量已经跃居世界第一[3]。 我国现今广泛用于商业栽培的菌株大部分是从U1和U3演化而来H]，遗传背景狭窄。且目前，食 用菌主要是采用形态学特征为分类依据，虽然在一定程度上形态特征能在类群层面进行很好的划分， 但子实体的形态性状容易受到外界环境条件的影响而不稳定，如果结合其它分子生物学等辅助手段将 能更好地区分和鉴别不同的食用菌菌株嶂J。 近年来分子身份证的概念逐渐发展。分子身份证与指纹图谱的功能相同，但分子身份证作为数字 化、网络化的DNA指纹，在用于品种检索、对比时能够更加直观方便Mo。SSR(SimpleSequence Repeat)是目前一种广泛应用于遗传育种中的分子标记，相对其它标记，其具有操作简便快速、多态性 高、稳定性和重复性好、识别率高等特点[7]，并被广泛应用于油菜哺]、葡萄[9]、水稻口0|、大豆[1妇等品种鉴 定中。利用SSR标记结合相关数量遗传分析手段，可以进行种质资源的鉴定、亲缘关系的判断、种质特 异性的评价[121。而将若干SSR位点上的条带按一定规则转化成类似人指纹的图谱就称之为SSR指 纹图谱，数字化的指纹图谱即可构建各品种的分子身份证[10|。笔者尝试了采用SSR标记对国内外不 同来源的双孢蘑菇种质建立分子身份证，希望为科学鉴定、合理利用双孢蘑菇种质资源提供参考依据， 同时为在双孢蘑菇新品种审定与鉴定以及双孢蘑菇分子标记辅助育种提供一定的理论依据。 1材料与方法 1．1供试材料 国(1份)、荷兰(4份)、西班牙(1份)等地，其中栽培菌株54个，野生菌株26个，保存于吉林农业大学食 药用菌教育部工程研究中心，由福建省农业科学院食用菌研究所及四川省农业科学院土壤肥料研究所 提供，详细信息和菌株编号见表1。 1．2DNA提取 表1中菌株分别于PDA固体培养基上，25℃条件下培养7～10d，刮取新鲜双孢蘑菇菌丝体100mg 收稿日期：2016—05—09原稿；2016一05—27修改稿 (农业)科研专项(201503137)、吉林省教育厅“十三五”科学技术研究项目(2016191)资助 作者简介：王新新(1990一)，女，在读硕士，主要从事食用菌病害研究。 。本文通讯作者E_mail：yuli966@126．com 万方数据 第2期 王新新，等：双孢蘑菇种质ssR分子身份证的构建 7 左右，加入液氮迅速冷冻，后按新型植物基因组DNA提取试剂盒(北京康为世纪生物科技有限公司，北 京)说明提取其基因组DNA，一20℃保存。 表1供试双孢蘑菇菌株信息 TabIe1 t镐tstrai璐 A．bispDrHs 编号 原保藏号 特性 来源 编号 原保藏号 特性 来源 Character No． Characterorigin No． Originalcode Origin Originalcode