中国啤酒易感微生物的研究.pdfVIP

拓堆c出哥花漫蕾 ‘：、方贲投1李惠萍’涂京霞’王德良2末绪磊2 ’I—∥1广帅l珠江啤酒股份有限公司技术中心510308— 2中国食品发酵工业研究院100027 【摘要】通过措助I)N^基因剥序的万法，建正7个啤酒有害苗的茸库和分子指纹图谱一 由于中国啤酒已有的特征．使国内啤酒在易感微生物的种类、分布、危害风险水平、培养等方 面存在其独特性这为确立中国的纯生啤酒生产技术和有效的微生物控制体系提供T重要 的理论依据 【美键词】中国啤酒啤酒有害茼 前言 生产纯生啤酒不能只依靖}低温无蒲过滤和无 菌濉装．耍持续隹产质盛稳定n0纯生啤洒．必须宴 c凹联球苗特异引物： 行全过程的尢苗化管理．罔山啤酒^R造大多异有 低原盘汁浓度、低洒花漆加付低洒特度低pH、 搿辅料比等特点．。j欧洲啤洒停托较大差异．这 rI F酪乳杆菌特异引物 衅簋异全影响!L忐群微生物的分布．幽此研究中 同纯车啤酒封感微牛物的种类、分布及特性．危 16(一)：CGCTc∽TGcGGG^(ITrAAC 害风险水平及培养特性等，对建直纯乍啤酒有效 E酵母通用一jl物： 的微生物控制体系拈有十分重螫的意义。 26(+】50CCA 1材料与方法 AG一3。 11啤酒有害菌收集 从啤酒牛产拿址程的’n成品、成品酵母菌 在总体积为25uL的PcR】豆I∞体系中： 种．清洗水皿没备表而取样，始膜过滤取截黼在膜 j：F游引物各 O5“mtd 2 L的污染曲】。口十酒有宙苗培养基平扳J二26±1t 10xhu娲r(一MECI：)5“ 扶氧培养7一Io天，牡蔺1暮经单细胞分离．富集培 100¨mol MgCI，25pmH，dNTP 养后接种于无菌啤洒rp培养．使啤酒发生混浊的 TaU酶 04u 即可确定为啤洒耵害菌 模板DN^ 4“L 1 2DNA的提取 J)cR扩增条件： 分离得到的啤洒冉害菌于有害菌液体堵养基 94t变性4…．94℃lmm．52℃4阻．721： lmin30s．35个循环．最后72℃延伸10m；n。 中26±l℃培养24h．离心(3000mm×】Omin)收焦菌 体．提取DNA，具体方法见“分子克隆实验指南”。 扩增产物竖纯化后直接作为序列测定的摸 1 板．于377喇1)H^自动测序仪上直摇进行PcR驯 3细菌16sfoNA和酵母26srDNA的扩增 川到的引物序列如下： 序。 a细菌通川引物： 1 4数据处理 】6(+)5’一C^GACI’rIU^】CCr(；(，cTc^(；一3 将所获i#的睁列输^Geneb卟k．以bl拈t程序 16(一)51一CTG^GCCAGG^7rcA^^crcl℃一3埘数槲库小的所有序列进行比较分析。 h短乳朴苗特异引物： 2结果与讨论 21啤酒有害菌库殛分子指纹图谱 24 收稿日期：201】0