兽医微生物综合实习实验报告作业.doc

华南农业大学实验报告 实验项目名称：《兽医微生物》综合实习 所属课程名称：《兽医微生物学》 学生姓名：杨滨 学号：200730330126 专业年级：07动医（1）班 成绩： 一、实验目的 1．掌握营养肉汤、血琼脂平板、麦康凯平板、普通琼脂、三糖铁层琼脂的配置方法。 2．细菌的分离培养技术（解剖、病料的采集，从组织中分离细菌、培养细菌、移植细菌、纯化细菌，细菌接种）。 3．细菌的鉴定技术（光学显微镜油镜的技术，组织涂片，在组织材料中认识细菌、辨别细菌、生化实验、血清学实验技术及细菌片的涂片、染色、镜检等技术）。 4．病毒的鸡胚分离培养技术（鸡胚死活的鉴定、鸡胚的接种、胚液的收集）病毒的血凝试验和血凝抑制试验。 5．认识真菌（酵母菌、青霉菌、曲霉菌、毛霉菌、根霉菌）的形态。 二、实验要求 1．通过本次综合实习全面系统地掌握兽医微生物学的基本技术和细菌检验的基本程序，掌握各种生理生化试验的原理及试验方法，将理论与实践有机统一。 2．加强对临床常见病原菌鉴定本领的操作训练。 3．熟练掌握微生物实验常用仪器的使用及培养基制备的原则和方法。 4．对每一步实验要认真对待，对实验结果应详细记录，仔细分析，以便得出正确的鉴定结论，实习结束后，全面总结并写出实习报告。 三、实验内容 1．细菌的分离及诊断 2．病毒的分离及诊断 3．真菌的观察 四、实验材料与设备 1．实验材料 (1) 无菌注射器、抗凝剂、健康鸡、健康兔、血琼脂基础、锥形瓶、蒸馏水、麦康凯琼脂粉、三糖铁琼脂粉、营养琼脂粉、营养肉汤基础、雏鸡、小白鼠、木板、图钉、剪刀、接种环、接种针、镊子、各种染色液、移液枪、葡萄糖培养管、蔗糖培养管、乳糖培养管、甘醇培养管、靛基质培养管、硫化氢培养管、H2O2、氧化酶试纸、巴氏杆菌标准毒、巴氏杆菌阳性血清、靛基质指示剂、载玻片、显微镜等 (2) 装有不明病毒的80编号小管一支、9-10日龄鸡胚、打孔器、一次性注射器、剪刀、记号笔、镊子、灭菌乳钵、离心管、空平皿、玻璃沙、空试管几支、西林瓶、青霉素、移液管、锥型瓶、U型96孔微量反应板、蛋架 (3)载玻片、接种环、酵母菌玻片、青霉菌玻片、曲霉菌玻片、毛霉菌玻片、根霉菌玻片、镊子、盖玻片、显微镜 2．实验设备 高压消毒炉、恒温培养箱、离心机、电子天平、冰箱、轻微振荡器 五、实验方法和步骤 （一）细菌的的分离及诊断 1．实验前准备（此步分量为一组6个人） （1）心脏采血：触摸健康兔左前肢以下、胸骨以上、靠左的位置，通过心跳感觉心脏位置，用碘酒、酒精棉球消毒，用无菌注射器抽取1ml抗凝剂，并润湿注射器，待酒精干后，将针插入，边插边回抽，当有血冲上针筒时，即抽取血9ml，用作血平板。 (2）①血细胞凝集试验（HA）（单位：ūl） 孔号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 稀释 度 1：2 1：4 1：8 1：16 1：32 1：64 1：128 1：256 1：512 1：1024 1：2048 对照 生理 盐水 病毒 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 弃 鸡红细胞 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 用轻微震荡器震荡1~2min， 放入37℃箱中15~30min.判断1个单位血凝价,并配成4个单位病毒溶液. 血细胞凝集抑制试验（HI）（单位：ūl） 孔号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 稀释 度 1：2 1：4 1：8 1：16 1：32 1：64 1：128 1：256 1：512 1：1024 1：2048 对照 生理盐水新城疫血清 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50