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动物细胞工程复习题 动物细胞培养相关概念（原代培养、传代培养、细胞株、接触抑制） 原代培养：指将培养物放置在体外生长环境中持续培养，中途不分割培养物的培养过程。 传代培养：当细胞持续生长增殖到一段时间达到一定的细胞密度后，就应当将细胞分离到新的培养器皿并补充新的培养液进行培养，即为～。 细胞株：细胞系经过克隆或其他方法而得到的由单一类型的细胞群体建立的亚系称为细胞株。 接触抑制：细胞相互接触后，如果培养的是正常细胞，由于细胞的相互接触能抑制细胞的运动，这种现象称为～。 简述动物细胞体外培养的一般条件。 1、无菌、无毒的环境：首先应保证被培养的细胞处于无菌、无毒的环境，即对培养液和所有的培养用具进行无菌处理。通常还要在培养液中添加一定量的抗生素以防培养过程中的污染。 2、营养物质：细胞体外培养所需营养物质与体内基本相同，需要有葡萄糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等。通常还需加入血清、血浆等一些天然成分。 3、温度和pH：细胞体外培养的适宜温度一般与动物的体温相近。多数细胞生存的适宜pH为7.2～7.4。 4、气体环境：细胞培养所需气体主要有O2和CO2，O2是细胞代谢所必需的，CO2的主要作用是维持培养液的pH。进行细胞培养时，通常采用培养皿或松盖培养瓶，将其置于含95%空气加5% CO2的混合气体的培养箱中进行培养。 什么是无血清培养基?有哪两部分组成？ 无血清培养基是全部用已知成分组配的不含血清的合成培养基。 基础培养基+促细胞生长因子 4、体外培养动物细胞的生长方式，类型。 生长方式可分为：贴附型生长细胞和悬浮型生长细胞 体外培养细胞寿命的过程，一代细胞的生长过程。 原代培养期、传代期、衰退期 潜伏期、对数生长期、稳定期、衰亡期 动物细胞大规模培养的方法。 转瓶培养 反应器贴壁培养 悬浮培养 固定化培养 （1）微载体培养系统 （2）中空纤维培养系统 （3）微囊培养系统 培养细胞的常规检查项目有哪些，怎样对培养细胞进行生物学鉴定。 培养液和pH检查 细胞生长情况分析 培养细胞的污染检测和排除 污染途径 污染对培养细胞的影响及污染的检测 污染的防治 污染的排除 举例说明细胞建系过程（教材260）。 试述单克隆抗体制备过程。 （1）细胞准备：①将抗原注射入小鼠体内，从小鼠脾脏中获得能产生抗体的B淋巴细胞。 ②实验室培养小鼠骨髓瘤细胞。 （2）细胞融合：①促溶剂：电激、聚乙二醇或灭活的仙台病毒。 ②融合细胞的种类：三种。 （3）细胞培养：利用动物细胞培养技术培养融合后的细胞。 （4）第一次筛选：筛选出杂交瘤细胞。 （5）第二次筛选：筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞。 （6）扩大培养：①体外培养：从细胞培养液中提取单克隆抗体。 ②体内培养：从小鼠腹水中提取单克隆抗体。 10、名词解释 胚胎移植：指对优秀雌性动物进行超数排卵处理，在其发情配种后一定时间内从其生殖道取出早期胚胎，移植到同期发情的普通雌性动物生殖道的相应部位，让其产生后代的技术。 超数排卵：在动物发情周期的适当时期，用促性腺激素进行处理，诱发其卵巢上大量卵泡同时发育并排卵的技术。 同期发情：就是利用某些激素制剂人为地控制并调整受体发情周期的进程，使供体与受体在发情的时间上相同或相近。 胚胎冷冻：将胚胎保存于低温或超低温的情况下，是细胞处于新陈代谢和分裂速度减慢或停止的状态，一旦恢复正常发育温度时，又能继续发育。 超数排卵常用的激素 促性性腺激素：促卵泡素（FSH）、促黄体素(LH)、孕马血清促性腺激素(PMSG)、人绒毛膜促性腺激素(hCG)、促排卵3号(LRH-A3) 孕激素：孕酮 前列腺素(PG) 胚胎移植的原则 (1)胚胎移植前后所处环境的一致性。指胚胎移植后的生活环境与胚胎的发育阶段相适应，具体包括以下几个方面。一是供体和受体种属上的一致性。二是生理上的一致性。即受体母畜和供体母畜在发情时间上的同期性。三是胚胎收集和移植部位的一致性。即从供体输卵管内收集到的胚胎应该移植到受体的输卵管内，从供体子宫内收集到的胚胎应该移植到受体的子宫内。 ⑵ 胚胎发育的期限。从生理学的角度讲，胚胎收集和移植的期限不能超过周期黄体的寿命，最迟要在周期黄体退化之前数日以及胚胎附植之前进行。因此，胚胎收集多在发情配种后的3～8天内进行，受体在相同的时间内接受胚胎移植。 ⑶ 胚胎的质量。在胚胎移植的操作过程中，胚胎不应当受到任何不良因素(物理的、化学的、生物的)的影响，移植的胚胎须经过鉴定确认是发育正常的。 简述胚胎移植的方法、程序及操作方法 程序：供体和受体的选择，供体的超数排卵处理，受体的同期发情处理，胚胎回收，胚胎检查及质量鉴定，胚胎移植。 （一）牛的胚胎移植 1、手术移植 先将受体母牛