工业微生物与育种学实验实验二微生物的分离纯化.ppt

工业微生物与育种学实验 Part Ⅰ 实验基本操作技能 实验二 微生物的分离纯化 内容提要 分离 纯化 形态观察 半固体培养基：穿刺接种 液体培养基接种 普通琼脂培养基：涂布平板，平板划线接种，斜面划线接种 浅盘固体接种 划线接种注意要点 划线时接种环与平皿约成30-40度角,轻轻接触,以腕力在琼脂表面轻快滑动,不能划破琼脂. 第一次划线应占平皿面积的1/10,以后每次划线约占面积的1/4—1/5. 划线为连续划线,不能间断.应占满平皿.划线不能交叉重复. 每次划完后接种环应灭菌. 细菌的分离 1、一般采用NA培养基，加入抗真菌剂(如放线菌酮和制霉素)，掺加浓度一般为50μg／m1， 以抑制真菌的生长。 2、琼脂平板在使用前应置于37℃培养箱中孵育l、2天。 3、培养基的生物物理学参数，如pH及盐分也应调节到与试样的生态系统参数值相近。 放线菌分离培养需考虑的生态参数： 温度、pH、离子强度、氧化还原电势和底物浓度。 一般采用高氏1号培养基，大多数放线菌的分离培养是在贫脊或复杂底物的琼脂平板上进行的。除嗜温性放线菌外，其他放线菌一般在培养4-20天内在分离平板上缓慢形成菌落。 选择性地添加抗生素，通常加入抗真菌剂制霉菌素或放线菌酮，以抑制真菌的繁殖。 真菌分离 利用低碳／氮比的培养基可使真菌生长菌落分散，利于计数，分离和鉴定。这里主要是利用营养成分的减少而使生长减慢，并由此限制真菌的迁涉生长。 一般采用PDA培养基 改变培养温度将有利于不同嗜温区真菌的分离。 有时，真菌子实体形成必须有光线，这在分离培养时应加以考虑。 （2）纯化 将分离得到的单菌落分别接种到单个平板上 （4）菌种保藏 最常见的保藏方法：斜面 细菌的保藏：甘油保藏 真菌的保藏：石蜡油保藏、孢子保藏 几种常用菌种保藏方法的比较 * ——宜宾学院 工业微生物与育种学实验 * ——宜宾学院 工业微生物与育种学实验 * ——宜宾学院 工业微生物与育种学实验 （1）接种 无菌操作： 在无菌箱或操作室内无菌的环境下进行 划线分离 稀释分离涂布平板 稀释分离倾注平板 厌氧微生物的分离 厌氧罐 厌氧手套箱 厌氧罐 厌氧手套箱 放线菌的分离 颜色反应：分离特定的菌株； 牛奶平板：分离蛋白酶产生菌； 待分离的微生物的生长特征明显不同 液体培养基分离纯培养 稀释法进行液体分离必须在同一个稀释度的许多平行试管中，大多数（一般应超过95%）表现为不生长。 单细胞（孢子）分离 一般采用显微操作仪，在显微镜下进行；操作难度与细胞或个体的大小成反比； （3）形态观察 菌落（colony）： 单个（或聚集在一起的一团）微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度可以形成肉眼可见的、 有一定形态结构的子细胞生长群体 众多菌落连成一片 菌苔（lawn） 不同微生物在特定培养基上生长形成的菌落或菌苔一般 都具有稳定的特征（形状、颜色等），可以成为对该微 生物进行分类、鉴定的重要依据。 同一细菌在不同的培养平板上形成不同的特征菌落 菌 连续在培养基上（内）移种 种 生活态 传代培养保藏法 连续在活宿主上（内）移种 保 固体斜面 藏 湿法 半固体琼脂柱 方 休眠态 液体介质（蒸馏水、糖液、其它溶液） 法 干法 藏在玻璃管内 吸附在合适的载体上 菌种保藏的方法 * ——宜宾学院 工业微生物与育种学实验