三种连接子多肽对抗癌融合蛋白翻译后剪切效果比较研究.PDF

生物化学与生物物理进展 Progress in Biochemistry and Biop hys ics 2014, 4 1(6): 558~566 种连接子多肽对抗癌融合蛋白 翻译后剪切效果比较研究* 1, 2) 2) 1) 1) 2) 1) 1) 2)** 李红艳 周志明 潘 强 杨冬梅 顾锦法 沈佳妮 王世兵 章康健 (1) 江理工大学生命科学学院，新元医学与生物技术研究所，杭州310018； 2) 中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所，上海200031) 摘要 IL-24 和Smac 为靶向癌症的多基因治疗研究中重要的候选基因 在构建IL-24 和Smac 双基因表达载体过程中，选择 一个稳定高效的连接子非常关键 利用三个不同的连接子多肽序列IETD、EEED 、F2A 构建三个真核表达质粒pcDNA3.1( )- + IL-24-IETD-Smac 、pcDNA3.1( )-IL-24-EEED-Smac 、pcDNA3.1( )-IL-24-F2A-Smac ，并联合5- 氟尿嘧啶(5-FU) 处理研究各连 + + 接子介导的融合 白剪切效果 上述实验结果表明，在三种IL-24-linker-Smac 双基因表达载体中，F2A 连接子剪切效果最佳 且与caspase 活性成正相关 IETD 、EEED 连接子介导的融合 白都有一定的剪切，但IETD/EEED 多肽影响了上游IL-24 白的半衰期，加速了剪切后IL-24 蛋白的泛素化降解 本研究为构建靶向癌症应用的双基因或多基因载体提供了设计参考 关键词 连接子多肽，IETD ，EEED，F2A ，caspase 活性 学科分类号 Q2，Q7 DOI: 10.3724/SP.J.1206.2013.00489 近年来，在癌症基因治疗过程中，多基因联合 著诱导肝癌细胞caspase 活化，并在肝癌移植肿瘤 治疗成为一个重要的研究方向，选择良好的两个或 模型中取得很好的治疗效果 多个基因靶向癌症往往能获得很好的抗癌效果 目前介导双基因或多基因表达的方法主要有两 [1-3] Liu 等 利用病毒携带双基因，如 TRAIL、 种：第一种是同一载体携带两个不同的基因表达 MnSOD、IL-24 、Smac 等，靶向肿瘤细胞取得了很 框，即在一个载体上利用2 个启动子各驱动表达一 [4] [5] [6] 好的抗肿瘤效果 Pei 等 、Zhang 等 、Wang 等 个基因，这种构建方法是根据不同启动子在不同转 利用腺病毒携带双基因在细胞水平和动物体内癌 录水平上进行基因的表达，一般可以保证2 个基因 植肿瘤模型中能有效抑制肿瘤的进一步生长 的高效表达，但是在靶向肿瘤的相关应用研究中由 IL-24 为一种细胞因子，属于IL- 10 家族，它 于载体(一般为病毒载体)特性表现出不足之处，如 可以选择性诱导细胞caspase3/8 活化，并诱导癌症 腺病毒载体对插入基因的大小有容量限制，而痘病 细胞凋亡，而对正常细胞无毒副作用或极其微小， 毒载体中可搭载的外源基因容量大，但要求插入的 因此在癌症的基因治疗研究中得到广泛应用[7] 基因必须使用病毒自身相关的启动子，这也限制了 [8] [9]