不结球白菜BrCDF1的克隆和蛋白亚细胞定位及其-南京农业大学学报.PDF

－ 　 南京农业大学学报　 ２０１７ꎬ４０(５):８１２ ８１９ ｈｔｔｐ:/ / ｎａｕｘｂ.ｎｊａｕ.ｅｄｕ.ｃｎ 　 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ＮａｎｊｉｎｇＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ＤＯＩ:１０.７６８５/ ｊｎａｕ.２０１６１２０４９ 吴小婷ꎬ邵帅旭ꎬ李英ꎬ等.不结球白菜ＢｒＣＤＦ１的克隆和蛋白亚细胞定位及其与ＢｒＦＫＦ１蛋白的互作验证[Ｊ].南京农业大学学报ꎬ２０１７ꎬ４０(５): － ８１２ ８１９. 不结球白菜ＢｒＣＤＦ１ 的克隆和蛋白亚细胞定位 及其与ＢｒＦＫＦ１蛋白的互作验证 １ １ １ １ １ ２ １∗ 吴小婷 ꎬ邵帅旭 ꎬ李英 ꎬ张昌伟 ꎬ侯喜林 ꎬ沈振国 ꎬ刘同坤 (１.南京农业大学作物遗传与种质创新国家重点实验室/ 农业部华东地区园艺作物生物学 与种质创制重点实验室ꎬ江苏 南京 ２１００９５ꎻ２.南京农业大学生命科学学院ꎬ江苏 南京 ２１００９５) 摘要:[目的]本文旨在揭示ＣＤＦ１基因在不结球白菜(Ｂｒａｓｓｉｃａ ｒａｐａ ｓｓｐ. ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ)抽薹开花过程中的调控机制ꎬ验证其是否 与ＦＫＦ１蛋白发生互作ꎮ [方法]以‘苏州青’为材料ꎬ采用同源克隆方法获得ＢｒＣＤＦ１基因全长序列ꎬ并与其他物种进行氨 基酸序列比对ꎻ将ＢｒＣＤＦ１与报告基因ＹＦＰ融合构建亚细胞定位载体ｐＥａｒｌｙＧａｔｅ１０１￣ＢｒＣＤＦ１￣ＹＦＰꎬ采用农杆菌介导的方法 将其瞬时表达于本氏烟(Ｎｉｃｏｔｉａｎａ ｂｅｎｔｈａｍｉａｎａ)叶片中ꎻ激光共聚焦显微镜观察ꎬ利用酵母双杂交和双分子荧光互补技术验 证不结球白菜ＢｒＣＤＦ１和ＢｒＦＫＦ１蛋白是否存在互作ꎮ [结果]ＢｒＣＤＦ１基因含有８７６ ｂｐ开放阅读框ꎬ编码２９２个氨基酸ꎮ 与甘蓝型油菜(Ｂｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓ)、野甘蓝(原变种)(Ｂｒａｓｓｉｃａ ｏｌｅｒａｃｅａ ｖａｒ. ｏｌｅｒａｃｅａ)、萝 卜(Ｒａｐｈａｎｕｓ ｓａｔｉｖｕｓ)的氨基酸序列比对 结果显示:ＢｒＣＤＦ１在进化过程中的保守程度分别为９１.１１％、８８.２５％、８４.７６％ꎬ保守性较高ꎮ ＢｒＣＤＦ１蛋白定位于细胞核中ꎬ ＢｒＣＤＦ１和ＢｒＦＫＦ１之间存在相互作用ꎮ [结论]ＢｒＣＤＦ１定位于细胞核ꎬ并且与ＢｒＦＫＦ１互作ꎬ在进化过程中保守性较高ꎬ并 可能参与了不结球白菜的光周期开花途径ꎮ 关键词:不结球白菜ꎻＢｒＣＤＦ１ꎻ亚细胞定位ꎻ酵母双杂交ꎻ双分子荧光互补 － － － 中图分类号:Ｓ６３４.３　 　 　 　 文献标志码:Ａ　 　 　 　 文章编号:１０００ ２０３０(２０１７)０５ ０８１２ ０８ Ｃｌｏｎｉｎｇ ｏｆ ＢｒＣＤＦ１ ｇｅｎｅ ａｎｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｓｕｂｃｅｌｌｕｌａｒ ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｔｓ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ＢｒＦＫＦ１ｉｎ ｎｏｎ￣ｈｅａｄｉｎｇ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｃａｂｂａｇｅ １ １ １ １ １ ２ １∗ ＷＵ Ｘｉａｏｔｉｎｇ ꎬＳＨＡＯ Ｓｈｕａｉｘ