小叶臭黄皮中单萜与倍半萜类成分探究.doc

小叶臭黄皮中单萜与倍半萜类成分探究 　　[摘要]研究小叶臭黄皮Clausena excavata茎和叶甲醇提取物的单萜和倍半萜类成分。小叶臭黄皮茎和叶提取物的乙酸乙酯部位经硅胶、RP-18和HPLC等色谱技术分离纯化，通过理化常数和波谱数据鉴定化合物的结构。从小叶臭黄皮茎和叶中分离得到10个化合物，分别鉴定为：1个单萜，命名为excamonoterpene（1）；9个倍半萜，即（6R，9S）-9，10-dihydroxy-4-megastigmen-3-one（2），（3R，6R，7E）-3-hydroxy-4，7-megastigmadien-9-one（3），（3S）-3-hydroxy-7，8-dihydro-β-ionone（4），（3S，5R，6S）-3-hydroxy-5，6-epoxy-β-ionone（5），（6R，9R）-9-hydroxy-4-megastigmen-3-one（6），（3S，5R）-dihydroxy-6，7-megstigmadien-9-one（7），（-）-loliolide（8），caryolane-1，9α-diol（9），2，6-dihydroxyhumula-3（12），7（13），9（E）-triene（10）。化合物1为1个新的单萜，2～10为首次从该种植物中分离得到。 [关键词]芸香科；小叶臭黄皮；单萜；倍半萜 小叶臭黄皮Clausena excavata Burm. f.是芸香科Rutaceae黄皮属植物，主要分布在越南、老挝、柬埔寨、缅甸、印度和我国南方地区[1-2]。其根、叶入药，用于治疗感冒发烧、痢疾、肠炎、尿道炎等[3]。据报道黄皮属植物含有香豆素[4-5]、生物碱[6-8]、苯丙素[9]、四降三萜[10]、黄酮[11]等。之前已报道了小叶臭黄皮的香豆素和生物碱成分[12-13]。本文对小叶臭黄皮茎和叶的化学成分进行继续研究，从中分离鉴定了10个单萜和倍半萜化合物，1为1个新的单萜，2～10为首次从该种植物中分离得到。 1材料 Bruker AM-400型核磁共振波谱仪；VG Autospec-3000质谱仪；Horiba SEPA-300数字式旋光仪；Bio-Rad FTS-135红外光谱仪；Shimadzu UV-2401A紫外光谱仪；Agilent 1100高效液相色谱仪，Zorbax Eclipse XDB-C18（Agilent，9.4 mm×250 mm，2 mLmin-1）色谱柱；柱色谱硅胶（100～200，200～300目）、薄层色谱硅胶板均为青岛裕民源硅胶试剂厂产品；反向材料Lichroprep RP-18（40～63 μm）为Merk公司产品；所用试剂均为化学纯或分析纯。 小叶臭黄皮风干的茎和叶（32 kg）于2010年采自云南省西双版纳，植物标本由中国科学院昆明植物研究所税玉民研究员鉴定为芸香科黄皮属植物小叶臭黄皮C. excavata。 2提取与分离 小叶臭黄皮风干的茎和叶（32 kg），粉碎后用95%工业甲醇回流提取3次，每次35 L×3 h，减压浓缩得到甲醇提取物。加水悬浮后，依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇等体积各萃取3次（15 L×3次），回收溶剂得到石油醚部分、乙酸乙酯部分和正丁醇部分。将乙酸乙酯部分（1.1 kg）用石油醚-丙酮混合溶剂溶解吸附于等量硅胶上，在室温下挥干溶剂经硅胶（100～200目）色谱柱分离，以石油醚-丙酮（10∶1，5∶1，4∶1，3∶1，2∶1，1∶1，0∶1）梯度洗脱，再换为氯仿-甲醇（8∶2～1∶1）。经TLC 5%浓硫酸-无水乙醇显色后合并为7个部分：Fr. 1～7。Fr.4（34 g）经硅胶（200～300目）柱色谱，以石油醚-丙酮（5∶1～1∶2）梯度洗脱得到6个部分Fr.4-1～Fr.4-6。Fr.4-2（98 mg）经反相RP-18色谱柱，以甲醇-水（30%～100%）梯度洗脱得到3个部分Fr.4-2-1～Fr.4-2-3。Fr.4-2-1经HPLC分离和纯化，以甲醇-水（52%）梯度洗脱得到化合物9（7 mg，tR=26 min）和3（13 mg，tR =32 min）。Fr.4-2-2经HPLC分离和纯化，以48%甲醇梯度洗脱得到化合物4（9 mg， tR =28 min）和8（12 mg，tR =35 min）。Fr.4-2-3经HPLC分离和纯化，以46%甲醇梯度洗脱得到化合物5（11 mg，tR =23 min），6（10 mg，tR =31 min）和10（8 mg，tR =37 min）。Fr.6（52 g）经硅胶（200～300目）柱色谱，以石油醚-丙酮（5∶1，4∶1，3∶1，2∶1，1∶1，0∶1）梯度洗脱得到5个部分Fr.6-1