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山桐子幼根离体培养技术探究 　　摘 要：以山桐子（Idesia polycarpa）的幼根为外植体，采用改良的MS培养基（除钙盐外，其余大量元素用MS的2/3量）附加不同浓度激素组合研究山桐子离体培养技术。结果表明，以改良的MS+TDZ0.02mgL-1（单位下同）+ NAA0.5+6-BA0.1诱导愈伤组织为最佳；以改良的MS+TDZ0.05+NAA0.1+6-BA1.0进行芽的分化与增殖为最佳；以改良的MS+TDZ0.02+NAA0.2+6-BA1.0进行壮苗培养为最佳；在1/2MS+NAA0.8+IBA0.3培养基上生根，最终再生成完整植株。 关键词：山桐子；幼根；组织培养 中图分类号 S79 文献标识码 A 文章编号 1007-7731（2014）03-04-22-02 山桐子（Idesia polycarpa）是重要的经济林树木，具有很好的开发价值和应用前景。笔者于2013年对山桐子进行了组织培养与快繁研究，以期为促进山桐子的规模化生产提供参考。 1 材料与方法 1.1 试验材料 试验于2013年在湖北生态工程职业技术学院植物组织培养室进行，材料选自山桐子种子萌发15d的无菌苗离体幼根。 1.2 外植体消毒 消毒处理前，将选好的幼根切成3～5mm大小，然后用流水冲洗30min。把处理好的幼根在超净工作台上用70%的酒精溶液浸泡30s，无菌水冲洗3～5次，然后转移至0.1%的HgCl2溶液中，浸泡消毒5～8min，最后用无菌水冲洗3～5次，接种到培养基上进行培养。 1.3 愈伤组织的诱导 将消毒好的外植体分别接种到以下8种培养基，每个处理20瓶，重复3次。每3d观察1次，30d统计愈伤组织诱导率。每处理接种10个外植体，3次重复。8种培养基如下：（1）改良的MS（除钙盐外，其余大量元素用MS的2/3量，以下同此）+TDZ0.02mgL -1（单位下同）+2，4-D0.3；（2）改良的MS+TDZ0.02+2，4-D0.5；（3）改良的MS+TDZ0.02+2，4-D1.0；（4）改良的MS+TDZ0.02+2，4-D0.5+6-BA0.1；（5）改良的MS+TDZ0.02+2，4-D0.3+6-BA0.3；（6）改良的MS+TDZ0.02+NAA0.3+6-BA0.1；（7）改良的MS+TDZ0.02+NAA0.5+6-BA0.1；（8）改良的MS +TDZ0.02+NAA0.5+6-BA0.3。以上培养基含3%食用白糖、0.7%琼脂，pH5.8～6.0。培养温度25～28℃，光照12hd-1，光强40μmolm-2?s-1。 1.4 芽的分化与增殖 将生长良好的愈伤组织块切成5mm×5mm大小在无菌条件下转接到下列4种新鲜的分化培养基中，每个处理20瓶，重复3次。每3d观察芽的分化、增殖以及生长状况，并统计芽的分化率和增殖系数，记录生长状况。4种培养基如下：（1）改良的MS+TDZ0.05+NAA0.1+6-BA1.5；（2）改良的MS+TDZ0.08+NAA0.1+6-BA1.5；（3）改良的MS+TDZ0.05+NAA0.1+6-BA2.0；（4）改良的MS+TDZ0.08+NAA0.1+6-BA2.0。以上培养基均含3%食用白糖、0.7%琼脂，pH5.8～6.0。培养温度25～28℃，光照12hd-1，光强40μmolm-2?s-1。 1.5 壮苗培养 将上述培养的芽苗切割分别接种在以下4种培养基上培养。每处理接种20瓶，每瓶接种15苗，培养容器为350mL罐头瓶，每个处理重复3次。接种后20d，从各处理中随机抽取10瓶试管苗测定株高、叶数、单株重量等生理指标。4种培养基如下：（1）改良的MS+TDZ0.02+NAA0.2+6-BA0.6；（2）改良的MS+TDZ0.02+NAA0.2+6-BA0.8；（3）改良的MS+TDZ0.02+NAA0.2+6-BA1.0；（4）改良的MS+TDZ0.02+NAA0.2+6-BA1.2。以上培养基均含3%食用白糖、0.7%琼脂，pH5.8～6.0。培养温度25～28℃，光照12hd-1，光强40μmolm-2?s-1。 1.6 生根培养 将高2～3cm的无根芽苗分别接种在以下4种生根培养基上培养。每处理接种20瓶，每个处理重复3次。20d后调查生根数、根长，生根率等指标。4种培养基如下：（1）1/2MS+NAA0.5+IBA1.0；（2）1/2MS+ NAA0.8+IBA0.1；（3）1/2MS+NAA0.8+IBA0.3；（4）1/2MS +NAA0.8+IBA0.5。以上培养基含2%食用白糖、0.7%琼脂，pH5.8～6.0。培养温度25～28℃，光照12hd-1，光强40μmolm-2?s-1。 2