应用聚酯纤维载体培养融合瘤细胞株-家畜卫生试验所.PDFVIP

153 應用聚酯纖維載體培養融合瘤細胞株 李文榮* 、黃金城 行政院農業委員會家畜衛生試驗所 摘要 現今世界潮流由於動物福祉的意識盛行，以老鼠腹水生產單株抗體的方法 並不適合量化生產，對於有大量抗體需求的領域而言，已有許多替代性的方法 可供應用。例如以中空纖維(Hollow-fiber) 之生物反應器、透析膜(Dialysis membrane)培養瓶製造單株抗體時，分別可以達到0.2~0.3 mg/mL ；0.1~1.5 mg/mL 抗體濃度，相較於必須不斷繼代培養且分泌抗體濃度僅20 μg/mL 的角瓶培養， 顯然效能更佳。本試驗以6 公克聚酯纖維載體(Polyester fabric carrier)於500 mL 吊籃式旋轉瓶進行融合瘤細胞株培養，接種細胞濃度為1x105 cells.mL-1 ，接種 量430 mL 。培養期間分別於第5 、6 、7 、8 日以批次式(Batch)各換液約二分之 一。自第9 日起，採灌注式饋料(Perfusion feed)再繼續培養5 日後終止實驗，共 收集約4 公升培養液。以酵素連結免疫分析法(ELISA)檢測分泌抗體濃度，並與 角瓶培養法培養三日以上培養液作對照。各階段收集液抗體反應強度為對照組 之2~4 倍；總產能大於使用160 支T175 角瓶每瓶50 mL 進行培養後所獲得8 公升 培養液抗體含量。本試驗細胞株乃分讓而來，無製備所需抗原，因此未定量抗 體濃度，惟聚酯纖維載體類似中空纖維，具有高單位體積之表面積比(Surface area/volume ratio)150 cm-1 ，依結果顯示適合高細胞密度大量培養單融合瘤細胞 株。 關鍵詞：不織布聚酯纖維載體；吊籃式培養瓶；融合瘤細胞 緒言 目前仍以接種小鼠產生腹水為主要通用方法，以獲得 大量高效價單株抗體。但此法需飼養動物，週期長， 應用融合瘤細胞株製備單株抗體（Monoclonal 不適合工業化生產；若使用免疫缺陷性小鼠，更需配 antibody）的技術，由 Milstain 和 Kohler[5]於 1975 合「無特殊病原菌動物房」飼養，作業繁瑣。然而， 年首次發表後，發展至今已三十年，在免疫學範疇內 最主要問題仍源自社會大眾對腹水小鼠承受、飼養及 已屬常規技術，在其他生命科學領域內的應用也更趨 處理[1,3,4]。我國於 1998 年 11 月 4 日公佈 「動 廣泛，目前已不局限在基礎科學研究和生醫檢驗領域 物保護法」，行政院農業委員會於 2001 年 7 月 13 範圍內，更有直接臨床治療學上的使用價值。 日發佈施行「動物實驗管理小組設置辦法」要求全國 以塑膠角瓶(T-flask)靜置培養融合瘤細胞所產 凡是利用動物進行實驗之醫院、藥廠、疫苗苦痛、緊 生的單株抗體量至多僅 20 μg/mL[3]，遠低於將融 迫的關注。 合瘤細胞接種BALB/C小鼠腹腔內形成腹水可達20 近二十多年來 ，世界各國為因應社會期待均普遍 mg/mL 單株抗體量之產量[4]，者相差懸殊。因此， 立法採用由研究機構 自我監控管理機制 ，透過成立實 154 驗動物管理小組，來管理各機構對於實驗動物的使用 積供細胞生長。使用時以 12 g/1L 濃度 ，裝載於吊 製造廠、大專院校等機構 ，應於 2004 年 7 月 12 籃式培養瓶內不銹鋼充填隔間內，經 121℃ ，20 日以前依該辦法之規定，設置動物實驗管理小組，建 分 ；溼熱滅菌後供培養使用。 立我國動物實驗管理制度。截至 2005 年 8 月底為