试验十真核细胞基因组提取.PPTVIP

实 验 一  自动物脾细胞中提取哺乳动物细胞基因组DNA 一、实验目的及背景 高等动物、植物的基因组相当宠大，如人类细胞基因组由3×10９个碱基对组成，果蝇基因组有1.4×10８个碱基对，水稻基因组有1.4×10９个碱基对，等等。 真核细胞基因组中，约1-1.5万个可表达的结构基因，其它大量存在的是调控序列和内含子序列。 某特定物种的基因组，包含了该物种生长、发育、繁殖等各项生理活动的几乎全部信息量，因而对真核细胞基因组的结构组成，以及表达调控的研究是至关重要的。 而研究的起点就是要获得纯度高－－不含蛋白质、糖类、酚、氯仿等污染；得率好－－以便有足够量用于分析；基因组相对完整－－以便用于以后ＰＣＲ（链式酶聚合反应）分析，RFLP（限制性片段长度）分析，基因文库的构建，基因探测等的研究。 基因组DNA的获得是进行基因结构和功能研究的重要步骤,基因组DNA的提取通常用于构建基因组文库、Southern杂交(包括RFLP—restriction fragment length polymorphism)及PCR分离基因等。 二、DNA提取的几种方法 CTAB法（植物DNA提取经典方法） 酚氯仿抽提法　 SDS法（蛋白酶K法） 其它 真核生物基因组DNA为双链线性分子，存在于细胞核内。基因组DNA的提取过程包括：DNA的释放（破膜）、DNA与蛋白质的分离、DNA的沉淀等过程。 分