体外培养星形胶质细胞缺氧／复氧后EAAT2、谷氨酰胺合成酶的表达.pdfVIP

中国现代 医药杂志2014年2月第 l6卷第 2期 MMJC，Feb2014，Vol16，No．2 · 49 · 体外培养星形胶质细胞缺氧／复氧后EAAT2、 谷氨酰胺合成酶的表达 曹志勇 董瑞 国 【摘要】 目的 对体外培养的星形胶质细胞 (AC)进行缺氧／复氧及亚低温干预 ，观察兴奋性氨基酸转运体 2 (EAAT2)、谷氨酰胺合成酶 (GS)的表达及亚低温干预对其 的影响 。方法 选用新生大 鼠的大脑皮层组织培养的AC，分为 对照组 (C)、缺氧／复氧组 (H／R)、亚低温组 (H／M+R)，缺氧 12h后 H／R组及 H／lVl+R组分别于37cc及 32℃复氧 。每组设复氧 2h、4h、8h、12h、24h、48h等时间点。MTT测定细胞活力，Western—blot半定量分析EAAT2、GS的表达情况。结果 ①M丌法 检测细胞活力：H／R组与 H／M+R组的细胞活力均 比C组的细胞活力低 ．而 H／M+R组的细胞活力较 H／R组高，差异有统计 学意义(P0．05)。@)Western—blot检测结果 ：H／R组与H／M+R组的EAAT2表达与C组相比较，均先减少 ，后随着复氧时间 延长逐渐增多，差异有统计学意义 (Pl0．05)，HM／+R组的EAAT2表达与H／R组相 比较，表达量下降趋势小 ，差异有统计学 意义 (P0．05)；HR／组与 HM／+R组的GS表达量随着复氧时间延长 。均呈现增高趋势，与 C组比较增高显著，差异有统计学 意义 (PO．05)，HM／+R组的GS表达量与 H／R组 比较增高趋势更加 明显，差异有统计学意义 (P0．05)。结论 缺氧／复氧及 亚低温干预可引起星形胶质细胞 EAAT2、GS表达的改变 ：32℃～35℃亚低温干预可以抑制缺氧 ／复氧损伤后兴奋性氨基酸 的释放 ，这可能是脑保护作用的重要机制之一 。 关【键词】 缺氧／复氧 星形胶质细胞 谷氨酰氨合成酶 亚低温 兴奋性氨基酸转运体2 Studyofhypoxia／reoxygenationonexpressionofexcitatoryaminoacid transporter-2andglutaminesynthetaseincul· turedastrocytes CooZhiyong，DongRuiguo．NeurologyDepartment，NantongFirstPeople Hospital，Nantong226009 【Abstract】 0bjective Toobservetheexpressionofexcitatoryaminoacidtransporter-2 (EAAT2)andglutaminesyn— thetase (GS)alongwiththeeffectofmildhypothermiaontheminculturedastrocytesinvitroafterhypoxiar／eoxygenationandmild hypothermia． Methods Cultured corticocerebralastrocytes (ACs)inneonatalratsweredividedintothreegroups：control group (C)，hypoxia／reoxygenationgroup (H／R)andmildhypothermiaplusreoxygenationgroup (H／M+R)．H／RandH／M+R groupwerereoxygenatedat37 and32℃ for12hoursafterhypoxia．respectively．Eachgroupwasreoxygenatedatfollowing timepoints：2h，4h，8h，12h，24hand48h．CellviabilitywasassayedbyMTr．Semi—quantitativeanalysiswasmadeontheex‘ pressionofEAAT2andGSbyWestern—blot．Results ~CellviabilitybyMTYassay：ThecellviabilityineitherH／RorH／M+ R groupwasweakerthanthatinthecontrolgroup，whilethatintheH／M+R groupwasstrongerthanthatinhteH／R rgoup；the differencewasstati