红辣椒红色素提取分离.ppt

红辣椒红色素提取分离 徐怀德 主要内容 实验目的 实验原理 仪器与试剂 实验步骤 思考题 注意事项 一、 实验目的 通过从红辣椒中提取红色素，了解从现代分离技术分离活性有机化合物的过程和基本操作；巩固和提高实验技能与常用测试仪器设备的使用能力；培养学生综合运用所学课程知识,学会观察思考和分析实验过程的能力，为今后从事科学研究工作打下基础；掌握薄层色谱板、色谱柱的制作及用以分离技术；培养学生理论联系实际作风，实事求是，严肃认真的科学态度和良好的工作作风. 二、 实验原理 辣椒红色素是一种存在于成熟红辣椒果实中的四萜类橙红色色素。其中极性较大的红色组分主要是辣椒红素和辣椒玉红素，占总量的50 %～60 % ，另一类是极性较小的黄色组分，主要成分是β- 胡萝卜素和玉米黄质。 辣椒红色素不仅色泽鲜艳，热稳定性好，而且耐光、耐热、耐酸碱、耐氧化，无毒副作用，是高品质的天然色素，广泛用于食品、化妆品、保健药品等行业。 我国辣椒资源丰富，种类繁多,从红辣椒中提取辣椒红素有广泛的前景。目前，国内外辣椒红素的生产方法主要有油溶法、超临界萃取法和有机溶剂法三种。 本实验使用有机溶剂法，以二氯甲烷作为溶剂。 辣椒红素分子结构 辣椒玉红素分子结构 目前世界各国均批准使用辣椒红色素,国际国内市场潜力很大,前景乐观。辣椒红是目前世界销量最大的天然色素，也是最走俏的产品。国外主要生产国有西班牙、印度等国，目前供不应求。美国一年需4000t 天然色素，其中辣椒红色素约1000t ，日本每年需辣椒红约500t，,加拿大、澳大利亚、新加坡、西欧市场的需求量也很大。世界每年对辣椒红色素的需求量约8000t ，国际市场潜力很大。我国辣椒资源十分丰富，南北均有种植,我国每年大量出口韩国、日本、欧共体等。辣椒红色素国内市场需求很大,国内三资企业出口产品和婴幼儿食品生产厂、饮料厂均使用天然辣椒红色素。 三、实验试剂与器材 实验材料：干燥红辣椒（辣椒尽量研细，提高提取效率） 试剂：二氯甲烷、硅胶G（200~300目）、沸石、石油醚、二氯甲烷。 标准品：辣椒红的脂肪酸酯、辣椒玉红素和β-胡萝卜素 仪器：100mL圆底烧瓶、球形冷凝管、布氏漏斗、漏斗、吸滤瓶、广口瓶、色谱柱、锥形瓶、玻璃棒、200mL烧杯、100mL烧杯、50mL烧杯、毛细管、滴管、滤纸、硅胶薄层板、量筒、层析缸、恒温水浴锅、循环水多用真空泵，紫外光谱仪、红外光谱仪等。 四、实验步骤 1．色素的萃取和浓缩 将干的红辣椒剪碎研细，称取2g，置于100 mL圆底烧瓶中，加入30 mL二氯甲烷和少许沸石（两三粒），装上回流冷凝管，70-80℃水浴加热回流提取30分钟。冷至室温后抽滤。将所得滤液用水浴加热回收二氯甲烷，蒸馏浓缩至干即为混合色素的粗品（小心水进入容器，影响干燥的速度和效果）。称重，计算得率。 注意：蒸发操作应在通风橱中进行或水浴加热回收二氯甲烷，安装冷凝装置在70～80℃水浴中蒸馏浓缩，回收溶剂。当瓶内剩余少量液体时，停止加热，将蒸馏残液转入表面皿，与沸水浴上蒸发近干，再加入少许无水乙醇驱赶残留的二氯甲烷，最后得到红色物质即为色素的混合物。 2．柱层析分离 选用内径1 cm，长约15-20 cm的层析柱，检查柱旋塞是不完好，有无渗漏现象，用硅胶20 g，再将40-60 ml二氯甲烷与20 g硅胶调成糊状（如不能调成糊状，可以多加二氯甲烷，硅胶和二氯甲烷用量可以根据柱的大小灵活调整，硅胶柱的 高度达到便于加样和操作就可以），通过大口径固体漏斗加入到柱中，边加边轻轻敲击层析柱，使吸附剂装填致密，并保持层析柱中的固定相不干(其二氯甲烷液面高出砂层2 cm即可)。 再打开活塞，待二氯甲烷溶液液面与硅胶上层的砂层平齐时，柱装好后用滴管汲取混合色素的浓缩液（或蒸干的色素液用0.5-1 ml二氯甲烷溶解），用一根较长的滴管将混合色素液加入柱顶（注意：上样不宜太），再打开旋塞，待色素溶液液面与硅胶上层的砂层平齐时，用一根较长的滴管缓缓注入少量洗脱剂（二氯甲烷），然后，小心冲洗内壁后用二氯甲烷混合液淋洗，观测记录色素的分离情况，并用不同的接收瓶分别接收先流出柱子的色带。当色带完全流出后停止淋洗。将相同颜色组分的接收液合并。回收溶剂蒸发操作应在通风橱中进行或水浴加热回收二氯甲烷，安装冷凝装置在70～80℃水浴中蒸馏浓缩，回收溶剂也可以用旋转蒸发仪蒸发浓缩，收集色素。 有兴趣的同学，可以把收集的不同色素组分继续进行二次色谱层析分离，进一步观测分离效果，方法同上。 3．柱效和色带的薄层检测 取三块硅胶薄层板，划好起始线，用不同的平口毛细管点样。每块板上点两个样，其中一个是混合色素浓缩液，另一个分别是第一、第二、第三色带。仍用体积比为1:3的石油醚：二氯甲烷混合液作展开剂展开。展开后记录各斑点的大小、颜色并计