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裂叶荆芥叶总黄酮提取技术 　　[摘 要]目的测定不同生长期裂叶荆芥叶中总黄酮的含量，为确定裂叶荆芥有效成分含量最高的适宜采收期提供科学依据。方法采用微波萃取技术从不同生长期裂叶荆芥叶中提取总黄酮，分光光度法测定总黄酮含量。结果与结论不同生长期的裂叶荆芥叶中总黄酮含量不同，但有明显的消长 规律 。7～10月份生长期间，总黄酮含量范围在12.140～22.000 mg/g。其中7～8月份含量转低，8月底含量达到最低，为12.140 mg/g；之后随着生育进程推进含量有所提高。9月份达最高为22.000 mg/g，之后又有所下降10月9月采收时为19.951 mg/g，因此，适宜的采收期应该为9月中下旬。 [关键词]裂叶荆芥 叶 总黄酮 中图分类号：TD823.8 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2014）10-0244-01 中药荆芥原名假苏，始载于《本经》，列为下品，为唇形科植物裂叶荆芥Schizonepeta tenuifolia （Benth） Briq.的干燥地上部分，全国各地均有栽培。荆芥生品具有解表散风、透疹等作用，民间用于 治疗 风寒感冒、咽喉肿痛、麻疹、风疹及多种皮肤病，为中医临床常用药物。近年研究表明，荆芥具有解热降温、镇静、镇痛、抗炎、止血、抑制心肌收缩、祛痰平喘、抗氧化等药理作用。荆芥炒炭后专功止血，可用于吐血、衄血、便血、崩漏、产后血晕等的治疗。目前从荆芥中分离得到的主要化学成分有挥发油类、黄酮类化合物、酚类、酸类，穗状花序含有单萜类化合物，黄酮类成分为其主要的有效成分之一。黄酮类化合物具有降脂、抗血栓、抗氧化、降糖等多种生理活性。本研究运用微波萃取技术测定不同生长时期裂叶荆芥叶中总黄酮的含量，旨在为荆芥栽培中确定适宜的采收期提供研究依据。 1 材料与仪器 1.1 材料的种植、管理和制备唇形科植物裂叶荆芥Schizonepeta tenuifolia （Benth） Briq.种子购于河北药都安国，在河北农业大学药用植物园选平整地块，用旋耕机对土壤旋耕18 cm，耙细，整平，作8×3.3 cm的畦。在畦内按行距30 cm开浅沟，沟深1 cm。播前将种子置38℃温水浸泡过夜，于2005-05-09条播于沟内。 幼苗出土前及苗期保持畦面湿润。7～10 d出苗，株高8～10 cm时间苗，株高13～15 cm时按株距10 cm定苗。幼苗期浇小水。7月份进入孕蕾期时控制浇水。雨季注意排水。适时松土除草，封行后不再中耕。 于7月15日～9月20日采回整株裂叶荆芥，摘取绿叶，自来水洗净，混匀，在105℃烘箱中杀青30 min，60℃恒温干燥8 h，粉碎，过20目筛待用。 1.2 主要仪器和试剂总黄酮提取采用MAS-I 型常压微波辅助合成/萃取反应仪（上海新仪微波化学科技有限公司），比色测定采用UV-2001自动扫描可见紫外分光光度计（日本日立）。 对照品芦丁购自 中国 药品生物制品检定所，95%乙醇、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠均为分析纯。 2 方法与结果 2.1 对照液的制备精确称取115℃减压干燥至恒重的芦丁对照品20.38 mg，置100 ml容量瓶中。加适量60%乙醇，置水浴上微热使溶解，放冷，定容至刻度，摇匀。即得（每毫升中含有芦丁0.203 8 mg）。 2.2 样品溶液的制备精确称取2 g（精确到0.1 mg）荆芥叶粉末（过20目筛）置250 ml圆底烧瓶中，加入60%乙醇溶液50 ml，将圆底烧瓶放入微波提取仪腔内，然后在圆底烧瓶口处连接一蛇形冷凝管，通入冷凝水，打开微波提取仪电源，设定反应工艺及微波提取时间。提取完成后，关闭微波电源。将提取液过滤并转移到 100 ml容量瓶中，再用同浓度的乙醇溶液多次淋洗圆底烧瓶，并将淋洗液过滤后一并转移到容量瓶中，定容。 2.3 最大吸收波长的确定取3个25 ml容量瓶，1号不加样品液，另两个分别加入1 ml对照液和3 ml样品液。3个容量瓶中再各加水至10 ml。然后，加5%亚硝酸钠1 ml，摇匀后放置6 min，加10%硝酸铝1 ml，摇匀放置6 min后，加1 mol/L氢氧化钠10 ml，再加水至刻度，摇匀。放置15 min后，以1号为空白，在200～800 nm波长范围内进行扫描，由扫描结果确定检测波长为510 nm。 2.4 标准曲线制备精确吸取2.1项中制备的芦丁对照液0.0，2.0，4.0，6.0，8.0，10.0 ml，分别置于25 ml容量瓶中，分别加水至10 ml，加5%亚硝酸钠溶液1 ml，混匀，放置6 min（不断振摇），再加10%硝酸铝溶液1 ml，混匀，放置6 min（不断振摇），加1 mol/L氢氧化钠溶液10 ml，各用蒸馏水定容至刻度，摇