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2气腹对妇科恶性肿瘤患者腹膜IL―6表达影响’ CO2气腹对妇科恶性肿瘤患者腹膜IL―6表达影响 　　[摘要] 目的 研究妇科恶性肿瘤患者进行腹腔镜手术时CO2气腹对腹膜间皮细胞中IL-6表达的影响，探讨CO2气腹环境下腹膜抗肿瘤免疫改变的机制。 方法 选择2010年9月～2012年9月就诊于我院的60例妇科肿瘤患者，其中腹腔镜手术恶性肿瘤（包括宫颈癌、子宫内膜癌、卵巢癌）组25例，子宫肌瘤组10例；开腹手术恶性肿瘤（包括宫颈癌、子宫内膜癌、卵巢癌）组15例，子宫肌瘤组10例。在手术开始时、30 min和60 min时采集切口处及远离切口处（麦氏点）壁层腹膜，以免疫组化法测定腹膜间皮细胞IL-6的表达。 结果 恶性肿瘤腹腔镜组切口处IL-6表达：30 min时为（4.05±1.08）显著低于0 min时的（8.00±2.51）（P0.05）。子宫肌瘤组切口处IL-6的表达在0 min时开腹组为（5.20±0.79）、腹腔镜组为（5.30±1.70）分别低于恶性肿瘤开腹组（8.00±2.51）、腹腔镜组（8.06±2.87）（P0.05）。各组切口处在手术60 min时IL-6表达低于远离切口，但比较差异无统计学意义（P0.05）。 结论 腹腔镜手术CO2气腹对腹膜IL-6表达有抑制，在妇科恶性肿瘤中的抑制比良性肿瘤更为显著，说明CO2气腹损伤腹膜免疫，可能对恶性肿瘤转移有促进作用，但CO2气腹对切口处的免疫抑制可能不是术后切口肿瘤种植转移的直接原因。 [关键词] CO2；腹腔镜；恶性肿瘤；腹膜；白细胞介素-6 [中图分类号] R737.3 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616（2013）10-14-04 随着腹腔镜技术在妇科肿瘤手术治疗中的广泛应用，尤其是近年来在恶性肿瘤治疗中的不断推广，腹腔镜术后肿瘤细胞腹腔扩散及穿刺孔转移的报道也日益增多，学者们进行了多种动物实验及临床研究，发现CO2气腹对腹膜腔局部环境产生影响。这些影响包括间皮层结构改变、pH紊乱和腹膜腔巨噬细胞反应性的变化导致腹膜免疫因子，腹膜活性细胞相联系的免疫功能损伤，可能有促进肿瘤转移的作用[1]。通过观察测定妇科良恶性肿瘤患者行腹腔镜手术过程中腹膜间皮细胞的IL-6的表达，探索CO2气腹对人体腹膜免疫的影响。 1 资料与方法 1.1 一般资料 选取2010年9月～2012年9月在我院妇产科就诊治疗的患者60例，经妇科检查、超声、细胞学、病理等检查考虑为早期妇科恶性肿瘤或子宫肌瘤，分为子宫肌瘤开腹组10例，子宫肌瘤腹腔镜组10例，术后病理证实均为子宫平滑肌瘤；恶性肿瘤开腹组15例，术后病理证实为宫颈鳞癌5例，子宫内膜腺癌5例，卵巢上皮癌5例；恶性肿瘤腹腔镜组25例，术后病理证实为宫颈癌11例，子宫内膜腺癌8例，卵巢上皮癌6例。 入选病例排除盆腔腹膜炎症，均经病理确诊为Ⅰ期宫颈癌、卵巢癌，Ⅱ期以下内膜癌，妇科恶性肿瘤无腹膜转移，无肝肾功能异常，无内分泌疾病及其他部位恶性肿瘤病史，无放、化疗病史。各组年龄，体重均差异无统计学意义（表1）。子宫肌瘤患者子宫肌瘤剔除或全子宫/+附件切除，恶性肿瘤患者行全子宫双附件切除+盆腔淋巴结清扫术（卵巢癌患者加行大网膜、阑尾切除）。 1.2 方法 手术均采用静脉气管插管吸入复合麻醉，开腹组进腹后起算时间，腹腔镜手术采用全自动气腹机形成CO2气腹，充气流量设定为15 L/min，腹腔内CO2气腹压力维持在15 mm Hg，于充气至气腹压力为15 mm Hg起算时间，手术0 min、30 min、60 min时分别在切口（气腹组气腹Trocar切口）、远离切口麦氏点处采集患者1 cm×1 cm腹膜，10%甲醛固定，石蜡包埋切片，采用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连接法。1?100兔抗人IL-6（武汉博士德公司）4℃过夜。1?200生物素标记的羊抗兔IgG二抗（丹麦DAKO公司）37℃恒温孵育30 min。1?300酶标底物辣根过氧化物酶标记链球菌亲和素（丹麦DAKO公司），37℃恒温孵育30 min。3，3二氨基联苯胺（武汉博士德公司产品）显色。PBS代替一抗做阴性对照。镜下腹膜间皮细胞结构清晰，胞浆内有棕黄颗粒沉着，染色明显高于背景，采用Axioplan 2 imaging显微图象分析系统（德国Zeiss公司）对腹膜IL-6进行半定量测定：强阳性率0% 0分，1%～10% 1分，11%～30% 2分，31%～100% 3分；阳性率0～10% 1分，11%～30% 2分，31%～50% 3分，51%～70% 4分，71%～100% 5分。以强阳性率×阳性率组织学评分的平均值作为IL-6的表达强度。 1.3