人参铜锌超氧化物歧化酶原核表达载体构建、表达和纯化.docVIP

人参铜锌超氧化物歧化酶原核表达载体构建、表达和纯化 　　[摘要] 研究提取人参叶中的总RNA，采用RT-PCR扩增人参叶Cu/Zn-SOD基因，构建pET-28（a）-Cu/Zn-SOD原核表达载体。使用Escherichia coli BL21（DE3）感受态细胞进行IPTG诱导表达。利用镍离子亲和层析进行纯化，并采用黄嘌呤氧化酶法测定目的蛋白的酶活。经RT-PCR扩增的人参Cu/Zn-SOD基因序列与GenBank数据库中公布的高丽参Cu/Zn-SOD基因序列同源性为99.00%。经IPTG诱导，目的蛋白的表达量约为44.42%，相对分子质量为16.30 kDa。纯化后的蛋白酶活可达到10 596.69 U?mg-1。通过分子生物学方法，成功构建了人参pET-28（a）-Cu/Zn-SOD原核表达载体，为进一步研究人参Cu/Zn-SOD生物学功能奠定了基础。 [关键词]人参；Cu/Zn-SOD；原核表达 人参为五加科Araliaceae植物人参Panax ginseng C.A.Mey的干燥根及根茎，是我国名贵中药。现代研究表明人参中富含皂苷、挥发油、蛋白质、糖类、脂肪酸、无机元素等多种化学成分[1-2]。超氧化物歧化酶（superoxide dismutase， SOD）是一种能清除生物体内产生的超氧阴离子自由基（O2）的金属蛋白酶类[3]，广泛存在于一切生物体