甲型H1N1流感 临床实验室检查.ppt

一、实验室检查项目 二、检测程序及注意事项 三、实验室生物安全 1.外周血象：白细胞总数一般不高或降低。重症患者多有白细胞总数及淋巴细胞减少，并有血小板降低； 2.血清学诊断：可使用间接ELISA、抗原捕捉ELISA、荧光免疫法等检测抗体； 4.病毒分离： ▲从患者呼吸道标本中分流感病毒 ▲常用的方法有鸡胚接种法和细胞培养法 ▲病毒分离法较敏感，但需要2-3周时间 ▲从呼吸道标本或血清中分离到特定病毒 ▲RT-PCR检测，有流感病毒RNA存在，经测序证实 ▲两次血清抗体滴度4倍升高 二、检测程序及注意事项  （一）流感临床标本的采集 多数标本取自患者上呼吸道鼻咽腔，其次为气管和支气管分泌物及尸检组织。 推荐采集呼吸道标本。 主要采样方法: 1)??鼻拭子 2)??咽拭子 3)??鼻咽抽取物 4)??漱口液 5)??鼻洗液 （二）临床标本运送及储存 新鲜的临床采集标本：4℃条件下24小时内运送至流感监测网络实验室。 标本送至实验室后，病毒分离标本应尽快进行接种分离，24小时内能进行接种的可置于4℃保存，如未能接种应置-70℃或以下保存。 未能24小时内送至实验室的，应置-70℃或以下保存。 所有呼吸道标本应保存在4℃ ，并尽快放置在-70℃，如果没有-70℃度冰箱，标本应保存在4℃ ，但不应超过4天。 冻存的临床采集标本 :冻存的条件下，低温送至实验室。冻存的标本送到实验室后，24小时内能进行病毒分离的，可以放置4℃保存。如未能分离的标本应置-70℃或以下保存。 临床标本采集管建议使用带螺口的塑料管。 （三）临床标本处理 临床采集标本送至实验室后，须经处理后再进行病毒分离接种。 含聚丙烯纤维的拭子采集标本，先将拭子在管壁反复挤压后取出。 鼻腔或咽部洗液的标本，充分振荡标本管，将粘液打碎。置4℃待其自然沉淀5～10分钟，取上清5 ml。上清液可直接接种或低温保存。 鼻咽漱液或抽取液： 用干净灭菌过的毛细吸管，在无菌条件下反复吹打收集的溶液，以便打碎粘液，同样置4℃待其自然沉淀5～10分钟，取上清5 ml。上清液可直接接种或低温保存。 临床标本处理后，将原始标本分为三份，一份（40％）用于鸡胚接种，一份（30％）用于MDCK细胞接种，一份（30％）保存待复核用。 对于病毒分离阳性的标本－70℃保存6个月，在收到国家流感中心复核鉴定报告后，按照生物安全有关规定处理；病毒分离阴性的标本随时按生物安全的有关规定处理。 （四）血清标本的采集与处理 血清标本多用于流感暴发时血清学核实诊断及人禽流感待查病例诊断。 血清标本采集：包括急性期和恢复期双份血清。急性期应尽早采集，不能晚于发病后7天。恢复期在发病后2～4周采集。 方法： 取一根至少能装3 ml以上，干净和灭菌的血清管做好标记，并进行登记 静脉采2 ml血，放入准备好的上述试管中。 置室温数小时待血完全凝固。 1500～2000rpm离心10分钟，收集血清于1.5 ml 无菌管中，做好标记。 血清可置4℃存放一周，存放超过一周需置-20℃或以下保存。 三、实验室生物安全 （一）安全教育与人员职责 科室主任 安全员 全体员工 安全手册 健康管理 （二）实验室安全要求 ▲专用实验室或工作区 指定专人检测，配有生物安全柜。 ▲甲型H1N1流感病毒培养：应在具有资质的BSL-3实验室中进行 ▲临床标本应按照A类包装要求运送，并用干冰运输  ▲对采集自属于感染甲型H1N1流感病毒疑似病例的患者的临床标本进行的诊断性实验工作，应在BSL2 实验室内进行。 ▲所有样本操作均应在生物安全柜（BSC）内进行。 ▲病毒分离工作，应在BSL3 实验室内进行。 BSL-3 实验室管理 保持工作室整洁，物品放置有序，空气流通清新 ，卫生用具专室专用 ，专用实验室工作人员处理病原体前进行专门培训 。 实验室消毒 （1）空气消毒：通风 、消毒 （2）地面、墙壁、门窗 （3）检验台、桌面、椅子及门把等物品 （4）检测仪器 （5）检测样本用具 （6）检验报告单 （7）安全离开实验室 （8）发生与传染物