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药效学结合正交试验优选黄芩提取工艺 　　[摘要]为优选黄芩提取工艺，采用滤纸片法和抑菌率法测定黄芩水提物与60%乙醇提物的体外抑菌药效。以一测多评法测定4种有效成分黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素的含量。采用正交试验法，分别以4种有效成分提取量的总评归一值和抑菌率为指标，考察加水量、提取次数、提取时间的影响。确定最佳提取工艺为加水提取2次，每次2 h，加水倍量依次为12，10，该优选工艺所得提取物有较高的抑菌药效，稳定，可行。 [关键词]黄芩；抑菌；黄芩苷；正交试验 [收稿日期]2013-04-02 [基金项目]山东省中医药科技发展计划项目（2011Z-003-1） [通信作者]*于蓓蓓，硕士，助理研究员，主要从事中药化学及制剂研究，TelE-mail：ybb137@163.com中药黄芩为唇形科植物黄芩Scutellaria baicalensis Georgi的干燥根，味苦性寒，具有清热燥湿、泻火解毒、止血、安胎的功效[1]。黄芩是临床常用中药，其提取物保留了黄芩的有效成分群，能较好体现黄芩的中医药功效，在质量控制方面具有相当的优势，因此成为多种中成药的原料药，具有抗菌、抗炎、抗氧化、抗肿瘤和中枢神经保护方面的作用，用于治疗上呼吸道感染、泌尿系统感染、菌痢、肝炎、高血压等[2]。目前对黄芩提取工艺研究较多，但多以黄芩苷含量为指标，往往忽视其药效，而黄芩苷的含量高往往并不意味着药效高；同时黄芩素、汉黄芩素、汉黄芩苷亦是黄芩的主要特征性成分，在药材中含量高，药理活性显著[3-6]。文献报道黄芩多用水煎或60%乙醇提取[2， 7]，因此本研究以抑菌药效为指标比较黄芩水提物与60%乙醇提取物的优劣，并分别以黄芩4种有效成分提取量的总评归一值及抑菌率为指标，进行正交试验，优选提取工艺，并比较由2个工艺所制备提取物的抑菌效果，以此确定最佳工艺。 1材料 安捷伦1200系列高效液相色谱仪（包括自动进样器，紫外-可见检测器和色谱数据处理软件）；BP211D赛多利斯电子天平；Welchrom C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；RE52-99旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；LC-350A型超声波中药处理机（济宁市中区鲁超仪器厂）；LDZX-40KBS立式压力蒸气灭菌器（上海申安医疗器械厂）；7200型分光光度计（上海合利仪器公司）；THZ-82B气浴恒温振荡器（江苏金坛市医疗仪器厂）；ZPQ-280型智能培养箱（哈尔滨东拓科技开发有限公司）；VS-1300-U型洁净工作台（苏州安泰工空技术有限公司）；E200 型双目显微镜（日本尼康）。 黄芩苷（批号110797200307）、黄芩素（批号111595200905）购自中国食品药品检定研究院；汉黄芩素（纯度≥99%）、汉黄芩苷（纯度≥99%）均为本单位自制。色谱甲醇（批号20120927011，山东禹王实业有限公司化工分公司）；酵母提取物（B.R.）；胰蛋白胨（B.R.）；氯化钠、磷酸等其他试剂均为分析纯。金黄色葡萄球菌（ATCC 6538）、白色念珠菌（ATCC 10231）由山东省疾病预防控制中心提供。黄芩饮片（批购自亳州中药饮片厂，经山东省中医药研究院中药资源室林慧彬研究员鉴定为唇形科植物黄芩S. baicalensis的干燥根。 2方法与结果 2.1药效学考察 2.1.1滤纸片扩散法[8]供试菌种及培菌方法：金黄色葡萄球菌（ATCC 6538）第2代，白色念珠菌（ATCC 10231）第4代，分别用营养琼脂培养基和沙堡琼脂培养基平板37 ℃培养箱培养。 供试液制备：将黄芩饮片粉碎，过80目筛。精密称取2份药材粉末各2 g，分别加20倍水和60%乙醇加热回流提取2次，每次1 h，分别将提取液滤过，合并滤液，3 900 rmin-1离心10 min，取上清液，减压蒸干，用水分别转移至2 mL量瓶中，定容至刻度，摇匀，得每1 mL相当于原药材1 g的水提供试液和醇提供试液。 抑菌实验：分别用无菌棉拭子蘸取浓度为5×105～5×106 cfumL-1的金黄色葡萄球菌和白色念珠菌悬液涂抹3次到合适的培养基表面，滴加供试液10 μL到直径0.5 cm的滤纸片，阴性对照滴加蒸馏水10 μL，把滤纸片贴到培养基上，37 ℃培养24 h后测量抑菌圈直径。每种菌设3个平行组，重复试验2次，以抑菌圈平均值来评价抑菌效果。 黄芩水提液和60%醇提液对金黄色葡萄球菌和白色念珠菌均有抑制作用，对金黄色葡萄球菌的抑菌效果较明显，水提液抑菌圈直径为（14.3±0.2） mm，60%醇提液抑菌圈直径为（11.9±0.7） mm，二者有显著性差异；对白色念珠菌抑菌效果较弱，抑