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第35卷第6期 南 京 工 业 大 学 学 报 (自然 科 学 版) Vo1．35No．6
2013年 11月 JOURNALOFNANJINGUNIVERSITYOFTECHNOLOGY (NaturalScienceEdition) Nov．2013
doi：10．3969／j．issn．1671—7627．2013．06．018
谷氨酸棒杆菌argG基因缺失菌株的构建
汤 俊，郝 宁，许 晟，许 琳，严 明
(南京工业大学 生物与制药工程学院，江苏 南京 210009)
摘 要：构建 1株谷氨酸棒杆菌argG基因缺失菌株并观察其对 一瓜氨酸生产的影响。采用 crossoverPCR方法扩
增带有argG基 因上下游同源序列的DNA片段，连接至栽体 pK18mobsacB，构建敲除载体 pK18～AargG，转化至C．
glutamicumATCC13032，利用卡那霉素抗性正筛选和果聚糖蔗糖 sacB基 因负筛选获得 argG基 因缺失菌株。发酵
结果表明，argG缺失菌株60h积累2．52g／LL一瓜氨酸，出发菌C．glutamicumATCC13032不能积累三一瓜氨酸。
关键词：谷氨酸棒杆菌；三一瓜氨酸；基因敲除
中图分类号：TQ922 ．9 文献标志码：A 文章编号：1671—7627(2013)O6—0086—05
ConstructionofCorynebacterium glutamicum
mutantwith knockoutofargG gene
TANGJun，HA0Ning，XU Sheng，XULin，YANMing
(CollegeofBiotechnologyandPharmaceuticalEnginneering，NanjingUniversityofTechnology，Nanjing210009，China)
Abstract：ConstructionofargG—deletedmutantandeffectofargG inactivationon 一citrullineproduction
in Corynebacterium glutamicum were investigated．Fordeletion ofargG gene in C．glutamicum ATCC
13032，crossoverPCR wascarriedouttogeneratetheargG deletionfragmentligatedtothesuicidevector
pK18mobsacB．TherecombinantplasmidpK18-AargG wastransferredintoC．glutamicum byelectropo-
ration．C．glutamicum ATCC3032一AargG wassuccessfullyobtainedbydoublehomologousrecombina-
tion．Thefermentationresultshowed thatL—citrullineproductionoftheargG geneknockoutstrainwas
achievedupto2．52g／L．
Key words：Corynebacterium glutamicum ；L—citurlline；geneknockout
谷氨酸棒杆菌 (Corynebacteriumglutamicum)作 在医药工业 中会有更好的发展前景。发酵法的核心
为广泛应用于生物转化、医药卫生和废物处理等领 是菌株的选育，伴随着 C．glutamicumATCC13032
域的典型工业微生物，尤其在氨基酸 (如 L一谷氨 的成功测序 ]，深入研究谷氨酸棒杆菌 L一瓜氨酸
酸、L一赖氨酸和 ￡一苯丙氨酸)工业生产中一直 占据 的代谢途径和采用基因工程方法定向改造菌种打开
中坚地位 j。L一瓜氨酸是
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