乳清酸诱导大鼠糖、脂代谢异常的机理以及海参皂苷与结构修饰物对其的影响研究Study on the mechanism of abnormal glucose and lipid metabolism induced by whey acid in rats and the effect of saponins and structural modifiers on it.pdfVIP

谨以此论文献给关怀和支持我的导师、朋友及家人！ 刘春花 乳清酸诱导大鼠糖、脂代谢异常的机理以及 海参皂苷与结构修饰物对其的影响研究 摘 要 近二十年，随着非酒精性脂肪肝(NAFLD) 的发病率日益增高，其发病机理、 预防与治疗成为当今肝病领域的研究热点。NAFLD 在代谢综合征人群中发病风 险较非代谢综合征人群高约4.7 倍，胰岛素抵抗(IR)是代谢综合征的核心病理基 础。虽然NAFLD 与胰岛素抵抗之间存在密切的联系，但是由于代谢综合征患者 通常存在肥胖、高血脂等直接影响胰岛素敏感性的因素，因此，NAFLD 与IR 两者之间的直接关联以及因果关系尚不明确。本论文选用了一个不伴随肥胖和高 脂血症的脂肪肝模型—乳清酸诱导大鼠脂肪肝模型，在排除了肥胖和高血脂等干 扰因素存在的条件下，研究了脂肪肝形成的长期过程中IR 和NAFLD 之间的直 接关联。另外，海参皂苷属于三萜皂苷，是海参中主要的生理活性物质之一，已 被证实其短期喂食对NAFLD 具有显著的预防效果。但是，皂苷类物质的溶血活 性和毒性，限制了其开发与利用。前期实验表明，海参皂苷通过酸解进行结构修 饰，可显著降低其溶血活性和毒性。本论文在研究了乳清酸诱导大鼠脂肪肝形成 过程中脂肪肝与胰岛素抵抗之间的先后关系后，利用该脂肪肝模型研究并比较了 海参皂苷及其结构修饰物、海星皂苷对乳清酸诱导大鼠脂肪肝发展过程中脂代谢 和糖代谢的影响，为海参皂苷的开发利用提供了理论依据。 首先，通过添加1%乳清酸到大鼠饲料中诱导产生NAFLD 模型，研究在OA 引发大鼠NAFLD 发展过程中IR 与NAFLD 的关系。 结果发现，随着饲养时间 的推移，肝脏脂质蓄积加剧，在诱导大鼠脂肪肝后期，出现了葡萄糖不耐受现象。 机理研究表明，在NAFLD 发病后期，OA 可通过上调肝脏SREBP-1c 及其靶基 因的表达持续促进肝脏脂肪合成；通过抑制肝脏胰岛素信号通路关键分子基因和 蛋白的表达，特别是t-Akt 、p-Akt (ser473) 的蛋白表达，使胰岛素信号传递受阻； 通过抑制肝脏糖异生关键限速酶基因的表达，抑制糖异生；通过上调GLUT2 的 蛋白表达，增加对葡萄糖摄取转运能力，使糖原在肝脏沉积，导致肝脏糖代谢异 常。在该模型中，IR 发生在NAFLD 之后，提示非酒精性脂肪肝的长期存在可能 直接导致胰岛素的抵抗性。 其次，本研究以海参皂苷为原料，经过弱酸和强酸降解，分别制备了脱硫海 参皂苷和海参皂苷苷元两种毒性较弱的海参皂苷结构修饰物。通过向乳清酸诱导 脂肪肝大鼠饲料中同时添加0.03%海参皂苷及其脱硫化合物、苷元化合物，研究 了海参皂苷及其经酸解的结构修饰物对NAFLD 的预防效果。结果显示，海参皂 苷经酸解修饰后得到的脱硫皂苷、皂苷苷元均能显著抑制大鼠肝脏TG、TC 含 量的增加，预防效果与天然存在的海参皂苷之间无显著差异。 最后，又进一步通过喂食1% OA 饲料6w 诱导大鼠脂肪肝后，再添加0.04% 海参皂苷及其结构修饰物、海星皂苷到含1%OA 的饲料中喂食大鼠8w，研究对 NAFLD 的治疗效果。一方面，长期海参皂苷及其修饰物脱硫皂苷、苷元与海星 皂苷都能显著抑制OA 诱导的肝脏TG、TC 的过度蓄积，海参皂苷苷元对脂肪肝 的治疗效果最佳。另外一方面，海参皂苷和海星皂苷的长期摄食均可刺激胰岛素 分泌，显著改善OA 诱导的脂肪肝大鼠葡萄糖不耐受现象。 本论文首次研究了乳清酸诱导大鼠脂肪肝形成过程中IR 和NAFLD 的因果 关系，对比了减毒后的海参皂苷结构修饰物与其本身对NAFLD 的预防效果，比 较了海参皂苷及其结构修饰物、海星皂苷对NAFLD 的治疗效果，为海洋皂苷的 深度开发提供科学依据。 关键词：脂肪肝；乳清酸；胰岛素抵抗；海参皂苷；海星皂苷 Studies of the mechanism by which orotic acid induce glucose and lipid metabolic disorders, and effects of sea cucumber saponin and its modifications in rats Abstract