新藤黄酸通过内质网应激诱导人结肠癌HCT116细胞凋亡的研究.pdf

Website http：／／xuebao．ahtcm．edu．cn E—mail ahxbbjb@163．com 安徽中医药大学学报 第 33卷 第 1期 2014年 2月 JANHUIUNIVCHINESEIVIED Vo1．33 No．1 Feb．2014 新藤黄酸通过 内质网应激 诱导人结肠癌 HCTll6细胞凋亡的研究 戴婷婷，程 卉，苏婧婧 ，李庆林 (省部共建新安医学教育部重点实验室 安徽中医药大学科研实验 中心，安徽 合肥 230038) [摘要]目的 研究新藤黄酸 (gambogenicacid，GNA)诱导人结肠癌 HCT1l6细胞凋亡的机制 。方法 采用 不同浓度的GNA作用细胞 24h，对照组是相 同浓度 GNA加 内质 网应激抑制剂 4-苯基丁酸 (4-phenylbutyr— icacid，4-PBA)共 同作用 HCT116细胞 24h。采用 甲基噻唑基四唑 (methylthiazolyltetrazolium，MTT)染 色测定两组细胞增殖抑制率的差异，采用吖啶橙 (acridineorange，AO)和溴化 乙锭 (ethidium bromide，EB) 染色观察细胞的形态学变化 ，采用膜联蛋 白V(AnnexinV，AV)一异硫氰酸 荧光素 (fluoresceinisothiocya— nate，FITC)／碘化 丙碇 (propidium iodide，PI)双重染色检测细胞凋亡率。结果 内质网应激抑制剂 4PBA 可 以缓解 GNA对 HCT1l6细胞增殖的抑制作用；AO／EB染色后荧光显微镜观察发现 GNA作用的细胞具 有凋亡特征 ；流式细胞仪检测显示4-PBA可降低 HCT116细胞的凋亡率。结论 GNA能抑制人结肠癌细 胞 HCT1l6增殖 ，诱导细胞凋亡 ，其诱导细胞凋亡的作用可能与 内质网应激途径有关。 [关键词]新藤黄酸；人结肠癌细胞 HCT1l6；细胞凋亡；内质网应激 [中图分类号-lR285．5 [文献标志码]A EDOI]lO．3969／j．issn．2095—7246．2014．01．023 藤黄作为我 国一种传统 的中药 ，具有 良好 的药 抑制剂 4-苯基 丁酸 (4-phenylbutyricacid，4-PBA) 用价值。藤黄味酸涩 、有毒 ，具有攻毒蚀疮 、破血散 阻断人结肠癌细胞 HCT116的应激反应 ，以探究内 结等功效，主治痈疽 、肿毒 、顽癣 、恶疮、跌打损伤 ，创 质 网应激在 GNA 诱 导 HCT1l6细胞凋亡 中的 伤出血及烫伤等口]。1984年 ，吕归宝l3从 中药藤 作用。 黄 中提取得到新藤黄酸 (gambogenicacid，GNA)。 1 材料 经过研究表明，GNA较藤黄酸具有抗癌谱广、抗癌 1．1 细胞 人结肠癌 HCT116细胞株：购 白中国 作用强和毒性低等特点。细胞凋亡是细胞产生的一 科学院昆明细胞库。 种程序性死亡过程 ，是细胞受损后积极主动发生 的 1．2 主要药物及试剂 GNA(亮黄色干燥粉末 ，纯 一 种应对机体损伤的生理过程 。细胞内经典的凋亡 度 99．0 ，批号 2012120101)：由安徽 中医药大学药 途径主要有死亡受体活化和线粒体途径 ，内质 网应 物化学教研室提供 ；RPMI1640培养基于粉：Gibco 激介导的凋亡途径是近年来发现 的新 的凋亡途径。 公司 ，批号 08612；胎牛血清 ：杭州 四季青生 物工程 周兰贞等 已经验证 GNA可 以通过影响 HCT116 公司 ，批 号 110117；甲基噻 唑基 四唑 (methylthia— zolyltetrazolium，MTT)：Amresco 公 司，批 号 细胞周期相关蛋 白，使细胞阻滞在 G。／O 期 ，进而 0793；二 甲基 亚 砜 (dimethylsulfoxide，DMS0)： 抑制细胞增殖 ，诱导细胞凋亡 。本实验在此基础上