973基金项目申请范文-作物高效利用氮磷养分的分子机理.docVIP

项目名称： 作物高效利用氮磷养分的分子机理 吴平 浙江大学 2005.12至2010.11 教育部 浙江省科技厅 BiFC（bimolecular fluorescence complementation）技术研究NRT2/NAR2蛋白的相互作用，将利用酵母单杂交技术分析其调控转录因子。 4、土壤磷活化相关基因功能鉴定与调控系统：植酸酶对饲料有机磷与外泌性植酸酶对土壤有机磷分解利用效率的研究。分别从黑霉菌和假单胞菌分离Phytase A基因，从玉米、水稻中克隆其同源基因。将植酸酶基因构建在载体pSphy上，构建所需元件：(1)根部特异表达启动子， (2)根外分泌信号肽序列(SP)，(3)植酸酶基因与CS基因，(4)终止子(TERM)。筛选标记Bar基因构建在载体pBar上，构建所需元件：（1）启动子，(2) Bar基因，(3) 终止子。另外，分别构建用于不加信号肽的植酸酶基因表达载体，同时用于转化，验证植酸酶胞外分泌和不分泌是否导致植株对磷吸收利用的差异。 5、氮、磷代谢影响农作物产量的分子机理：水稻、小麦氮、磷高效高产相关基因表达谱比较分析：利用氮、磷利用效率具显著差异的高产水稻和小麦品种作为材料，在水培或砂培条件下进行缺氮或缺磷处理、恢复供氮或供磷处理、及对照处理，在苗期和灌浆期分别取根和地上部样本（灌浆期取旗叶和发育种子），提取总RNA用于Affymetrix公司的基因组芯片进行杂交分析基因表达谱的异同。关键调控基因的克隆及功能鉴定：对获得的转录组数据进行比较分析，找出水稻和小麦及超亲后代之间，氮磷缺乏条件和氮磷适量条件之间基因表达变化的共性和特异性；分子氮、磷代谢影响产量的分子机制；鉴定氮、磷高效高产的关键调控基因的候选基因（转录因子与代谢调控因子）。选出5-10个预测的关键调控基因，用反向遗传学（如RNAi和TILLING等）以及基因过量表达等技术，研究它们的分子生物学功能和评价其的利用价值。 6、水稻、小麦、油菜、大豆优异种质氮、磷高效关键基因及调控机制的聚合效应：不同氮、磷水平下养分吸收量与产量构成因子QTLs分析；结合相关转运、活化、利用关键基因与基因表达谱研究结果，分析影响高产的氮、磷高效途径；提出作物养分高效分子育种策略。以杂交稻汕优63的两个亲本珍汕97和明恢63及衍生的重组自交系群体；小麦氮、磷高效品种小偃54与对照京411及由该亲本发展的重组自交系群体；磷高效大豆B2与对照B10品种为亲本及由该亲本发展的重组自交系群体；油菜磷高效品种“97081”（湖北长角）与 对照“97009”及发展的重组自交系群体为研究材料。利用上述材料进行根箱试验，测定根构型参数及进行根构型参数的QTLs分析；进行大田与溶液培养试验测定植株氮、磷含量和产量构成因子并进行QTLs分析；通过比较QTLs信息与氮、磷高效关键途径及其调控系统芯片分析结果，比较活化、转运关键基因的表达结果，揭示高产、高效优异品种氮、磷高效的遗传基础与分子机理。 二、预期目标 总体目标 探明水稻、小麦、大豆、油菜高效吸收氮、磷养分以及氮、磷养分代谢高效促进作物产量关键途径的分子机理；挖掘一批氮、磷高效关键调控因子与结构基因；提供氮、磷高效优异种质材料；加快与提高我国培育氮、磷高效（氮利用效率提高10%，磷利用效率提高20%，达到发达国家水平。）作物新品种的速度与水平。为发展我国持续、高效的绿色农业作出重大贡献。同时培养和建立一支高素质的研究队伍。 五年预期目标 五年内，我们将在我国主要作物氮、磷高效利用关键途径的分子机理的理论研究，氮、磷高效利用关键基因获得与利用及养分高效分子育种策略等方面取得重大进展与突破，总体上进入国际前沿水平，部分领域达到国际领先地位。具体目标为： 揭示磷信号转导途径关键节点，氮、磷信号与植物激素信号互作途径； 建立磷高效根构型分子诊断理论和技术体系；深入认识磷胁迫信号调控根毛发生与伸长的分子机理； 明确高亲和磷转运体Pht1家族基因启动子中调控表达的共同和不同的重要识别元件、克隆关键转录调控因子和明确两个以上高亲和转运体的生理功能。明确高亲和硝态氮转运体NRT2/NAR2家族基因功能及其关键调控因子； 建立植酸酶增强表达及根系外泌性表达转基因作物，探明其活化土壤与有机物中有机磷的效率与调控机理。 发现5个以上可显著提高氮、磷高效利用新基因及10份以上氮效率提高10%以上、磷效率提高20%以上的水稻、小麦、大豆优异种质材料。 探明优异种质氮、磷高效关键基因调控途径的聚合效应，提出作物养分高效分子育种关键参数及选择策略。 在上述成果基础上，在国内外主流学术刊物上发表学术论文100篇以上，建设一个合理的学术梯队。在第一层次培养在国内外有较大影响的学科带头人。在第二层次培养数名中青年学术骨干。通过实现项目预期目标，