第二章_紫外可见分光光度法.pptVIP

学习目标 1. 掌握紫外-可见可见分光光度法的原理； 补充内容 --- 光的性质 那么光的本质是什么？? 光具有波动性，用波长(λ)和频率(ν)表示；光具有粒子性，用能量(E)表示不同波长的光具有不同的能量。 为什么我们看到的物质具有不同的颜色？这是因为物质选择性吸收了某种颜色的光，而呈显出被吸收光的互补光的颜色。 如: CuSO4溶液选择性地吸收白光中间的黄色光，故CuSO4溶液呈蓝色。 [Fe(SCN)6]3-呈血红色，说明其溶液选择性地吸收白光中的青色光。 如果溶液不吸收白色光，则溶液表现为无色透明；如溶液对所有颜色的光全部吸收，则溶液呈黑色。 引言：什么是紫外-可见分光光度法？ 是根据溶液中物质分子或离子对波长为200-760nm这一范围的电磁波（紫外和可见光谱）的吸收特特点建立起来的一种定性、定量和结构分析方法。 主要内容 §2.1 基本原理 §2.2 紫外-可见分光光度计 §2.3 分析条件的选择 §2.1 紫外-可见分光光度法的应用 §4.1 基本原理 当一束单色光通过均匀的溶液时，光的一部分被吸收，一部分透过溶液，还有一部分被器皿表面反射。设入射光强度为I0,吸收光强度为Ia，透射光强度为It，则： 1. 透光率 透光率越大，溶液对光的吸收越少；反之，透光率越小，溶液对光的吸收越多。 吸光度A 透光率的负对数称为吸光度，用A表示。A越大，表示物质的吸光能力越强。 二、朗伯--比尔定律 分光光度法定量的依据 （一） 光的吸收定律 当一束平行的单色光通过某一均匀、无散射的含有吸光物质的溶液时，在入射光的波长、强度以及溶液的温度等因素保持不变的情况下，该溶液的吸光度A与溶液的浓度C及溶液的厚度b的乘积成正比关系，称为朗伯-比尔定律： 4. 溶液本身发生化学变化的影响 溶液中待测组分发生了解离、缔合等作用，造成物质光化学性质改变，偏离了偏离朗伯-比尔定律。例如，铬酸盐在溶液中有如下平衡： 呈橙色，而 CrO42- 呈黄色，二者对不同波长 的光线的吸收性能完全不同。 5. 浓度的限制 朗伯-比尔定律假定物质分子之间不发生相互作 用，因此只有稀溶液时才基本符合。 浓度较高时，物质分子间会互相影响对方的电 荷分布，吸光性能发生改变，必然导致偏离。朗 伯-比尔定律 三 吸光系数 吸光系数K物理意义：液层厚度为1cm的单位浓度溶液的吸光度，它表示物质对特定波长光的吸收能力。一个物质在一定条件下的吸光系数为定值。通常有两种表示方法：??? K值的大小取决于吸光物质的性质、入射光波长、溶液温度和溶剂性质等，与溶液浓度大小和液层厚度无关。但K值大小因溶液浓度所采用的单位的不同而异。 ⑴?摩尔吸光系数ε 当溶液的浓度以物质的量浓度（mol·L-1）表示，液层厚度以厘米（cm）表示时，相应的比例常数K称为摩尔吸光系数。以ε表示，其单位为L·mol-1·cm-1。这样，比尔定律可以改写成 A=εbc ???? 物理意义：将样品浓度为1mol·L-1的溶液置于1cm样品池中在一定波长下测得的吸光度值。 摩尔吸光系数是吸光物质的重要参数之一，它表示物质对某一特定波长光的吸收能力。ε愈大，表示该物质对某波长光的吸收能力愈强，测定的灵敏度也就愈高。因此，测定时，为了提高分析的灵敏度，通常选择摩尔吸光系数大的有色化合物进行测定，选择具有最大ε值的波长作入射光。 （2）?百分吸光系数 一定波长下，吸光物质的溶液浓度为1g/100ml(1%)，液层厚度为1cm时， 溶液的吸光度。设吸光物质的摩尔质量为 M g/mol ，则： 　　 1mol/L＝M g/1000ml＝M/10·1g/100ml 　　 ∴ ε＝ ×  例：将 1.00mg 维生素 B12（摩尔质量 为 1355）溶于 25.00ml 蒸馏水中，用 1.0cm 比色杯，在 361nm 波长下，测 得吸光度为 0.400，计算百分吸光系数。 三 吸光系数 例：用氯霉素（分子量为323.15）纯品配制100mL含2.00mg的溶液，使用1.00cm的吸收池，在波长为278nm处测得