多指标测定优化聚酰胺树脂分离甘草苷工艺.docVIP

多指标测定优化聚酰胺树脂分离甘草苷工艺 　　[摘要] 通过聚酰胺树脂静态、动态吸附及解吸附试验，以甘草苷、异甘草苷及甘草酸3种成分为考察指标，研究优化了甘草中甘草苷的分离工艺，优化的工艺条件为：药液pH 7.0，药液中甘草苷质量浓度1.296 gL-1，上样体积3 BV，吸附后的树脂分别以水，10%，20%，30%乙醇（各3 BV）进行洗脱，收集20%乙醇洗脱部分，回收溶剂。结果显示，在此工艺条件下分离获得的提取物中异甘草苷、甘草酸等杂质成分含量较低，甘草苷纯度由4.86%提升到88.5%。该方法简单可行，获得的甘草苷提取物纯度较高，可为甘草苷的工业化分离制备提供依据。 [关键词] 甘草；聚酰胺树脂；甘草苷；异甘草苷；甘草酸 [收稿日期] 2013-03-29 [基金项目] 国家自然科学基金项目；江苏省自然科学基金项目（SBK201123752） [通信作者] 彭国平，研究员，主要从事中药化学与分析研究，Tel：（025E-mail：guopingpeng@ [作者简介] 郑云枫，助理研究员，研究方向为中药活性成分与质量评价，Tel：（025E-mail：zyunfeng88@126.com 甘草是常用传统中药，现代研究表明其主要成分包括甘草苷、异甘草苷等黄酮类成分以及甘草酸等皂苷类成分。其中甘草苷作为最主要的黄酮类成分，具有良好抗氧化、抗炎、抗溃疡等药理活性[1-2]，受到了国内外研究者的广泛关注。 传统甘草苷的精制分离常采用萃取法[3]，近些年树脂吸附法因其高效、宜于工业化等优点而被广泛使用，而目前的研究大多采用大孔树脂吸附法[4-6]，评价指标多采用单个成分或总黄酮成分（分光光度法检测）。由于甘草苷、异甘草苷、甘草酸等成分均为中等极性的苷类化合物，化学结构见图1，在大孔树脂上可被吸附与洗脱，因而以大孔树脂分离获得的甘草苷中往往含有异甘草苷和甘草酸等成分，影响了甘草苷的纯度。 本文依据聚酰胺氢键吸附分离原理[7]及甘草中不同化合物的结构特征，选择以甘草苷（liquirtin，LQ）、异甘草苷（isoliquiritin，ILQ）和甘草酸（glycyrrhizic acid，GL）为指标，采用HPLC考察聚酰胺树脂对这3种成分的静态、动态吸附及解吸附特性，优化确定高纯度甘草苷的分离工艺条件，以期为甘草苷工业化分离制备提供依据。 图1 甘草苷（a）、异甘草苷（b）及甘草酸（c）的化学结构 Fig.1 Chemical structures of liquiritin（a）， isoliquiritin（b）， and glycyrrhizic acid（c） 1 材料 Agilent 1100高效液相色谱仪，Agilent色谱工作站（美国安捷伦科技有限公司）；TGL-16G高速离心机（上海安亭科学仪器厂）；1810-D型自动双重纯水蒸馏器（上海申生科技有限公司）；BT-220S电子天平（赛多利斯科学仪器有限公司）；PB-10型pH计（赛多利斯科学仪器有限公司）；玻璃色谱柱（1.5 cm×40 cm，南京恩赐化玻有限公司）。 甘草购自内蒙古杭锦旗，批甘草苷（批号111610-200604）、甘草酸铵对照品（批号110731-200807）购自中国食品药品检定研究院；异甘草苷对照品（实验室自制，纯度98%）；聚酰胺树脂（国药集团化学试剂有限公司）；乙腈（色谱纯，fisher有限公司）；冰醋酸（色谱纯，天津市北辰方正试剂厂）；乙醇为分析纯；实验用水经自动双重纯水蒸馏器处理。 2 方法与结果 2.1 色谱条件[8] Kormasil C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相乙腈（A）-0.2%甲酸溶液（B），梯度洗脱，0～10 min，18%～25%A，10～30 min，25%～45%A，30～45 min，45%～70%A，45～60 min，70%A；进样量10 μL；柱温30 ℃；检测波长0～15 min，276 nm，15～60 min，254 nm；流速1.0 mLmin-1。 2.2 对照品溶液的配制及线性关系 精密称取甘草苷、异甘草苷和甘草酸对照品适量，用50%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得1.04，0.56，2.48 gL-1的混合对照品溶液。 精密量取对照品溶液，采用倍比稀释法，分别制成系列浓度的溶液，吸取上述系列溶液各10 μL，按2.1项下色谱条件进样分析，测定峰面积。以峰面积（Y）为纵坐标，对照品浓度（X）为横坐标，进行线性回归，回归方程分别为甘草苷Y=9 519X+67.33（R2=0.999 7）；异甘草苷