反应型比例荧光探针检测多巴胺-上海有机化学研究所.pdfVIP

Support information for： 反应型比例荧光探针检测多巴胺 a *a a *,a 赵振盛 郭旭东 李沙瑜 杨国强 (a 中国科学院化学研究所 北京市海淀区中关村北一街2 号 100190) 1 仪器与试剂 F-7000 荧光分光光度计， UV-3010 紫外可见分光光谱仪 （日本日立公司）， 核磁共振仪 （Bruker Avance III 400 ），QP2010 型气相色谱质谱联用仪 （GC-MS ） （日本岛津公司）。1-溴芘、多巴胺、正丁基锂、硼酸三甲酯、镁带、氘代氯仿 等购自百灵威公司；无水乙醚、二氯甲烷等溶剂购自北京化工厂。除特别指出之 外，所有试剂未经进一步处理。 2 实验部分 2.1 HMPB 在PBS 中对多巴胺的荧光响应 取20 µL 浓度为1 mM 的HMPB 乙腈溶液加入到2ml 含有癸基三甲基溴化铵 （最终浓度为0.14M ）的PBS 中。加入4 µL 浓度为1mM 的多巴胺水溶液 （最终 浓度为2μM ），在激发波长为365nm 下测定375nm-600nm 范围内，HMPB 荧光 光谱在10min 内的变化。 2.2 HMPB 对多巴胺的定量检测 取20 µL 浓度为1 mM 的HMPB 乙腈溶液加入到2ml 含有癸基三甲基溴化铵 （最终浓度为0.14M ）的PBS 中。加入不同体积浓度为10μM 的多巴胺水溶液（最 终浓度为 10nM~600nM ），在激发波长为365nm 下测定375nm-600nm 范围内， HMPB 荧光光谱在10min 内的变化。 ⁄ 按照公式：c = ks m计算探针 HMPB 对多巴胺的检出限。其中k为根据置 信水平选取的固定参数，在光学分析方法中通常取k值为 3 ；s 为空白测量标准 差，经过重复多次空白平行测定，通过计算得到s 为0.1218 ；m为线性关系的斜 率，其值为0.025 。 Create PDF files without this message by purchasing novaPDF printer () 2.3 HMPB 的选择性检测 取20 µL 浓度为1 mM 的HMPB 乙腈溶液加入到2ml 含有癸基三甲基溴化铵 （最终浓度为0.14M ）的PBS 中。加入20 µL 浓度为50mM 的氨基酸、谷胱甘肽、 葡萄糖、ATP 、ADP 、阴阳离子等水溶液 （最终浓度为0.5mM ）和20 µL 浓度为 1mM 的 L-DOPA 水溶液 （最终浓度为 10μM ），在激发波长为 365nm 下观察 375nm-600nm 范围内，HMPB 荧光光谱在10min 内的变化。 2.4 生物体系中检测DA 取20 µL 浓度为1 mM 的HMPB 乙腈溶液加入到2ml 含有癸基三甲基溴化 铵 （最终浓度为0.14M ）的尿液样品中。加入20 µL 浓度