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漆酶与锰过氧化物酶混合酶对染料脱色 　　摘要：目的：研究Lac与MnP的混合酶体系对结晶紫、刚果红、橙黄G、孔雀绿和甲酚红5种染料的脱色效果。方法：利用紫外可见光谱分析法，建立Lac与MnP的混合酶脱色体系，研究混合酶体系对5中染料的脱色效果。结果：除刚果红之外，在其它4中染料的脱色过程中起主要作用的酶均为Lac。除了单一漆酶对橙黄G的脱色效果最好外，其余4种均是混合酶的脱色效果较好。此外，混合酶体系对孔雀绿的脱色效果较好，脱色率达到95%以上，而对甲酚红的脱色效果不佳，最高仅为33%。结论：Lac与MnP的混合酶体系对结晶紫、刚果红、孔雀绿和甲酚红的脱色效果较好。关键词：漆酶；锰过氧化物酶；混合；染料；脱色 【分类号】：X703 漆酶（p-diphenol： dioxygen oxidoreductase，EC 1.10.3.2， Lac）是一种含铜氧化酶，属于铜蓝蛋白家族[1]。Lac是生物学、化学等领域的研究热点，尤其在染料脱色、生物制浆以及有毒化合物的降解等方面具有潜在的应用价值[2]。 锰过氧化物酶（Manganese peroxidase；EC 1.11.1.13，MnP）是一种真菌分泌的糖基化胞外蛋白，MnP的底物专一性弱，在Mn2+和H202存在时，可以氧化木质素、腐殖质以及有机污染物等物质[3]，所以具有极高的工业应用潜力。 白腐真菌Trametes sp. SQ01能够对多种合成染料脱色，如偶氮类、三苯甲烷类及蒽醌类染料，并且参与脱色的木质素降解酶主要是其分泌的Lac和MnP[4]。本文将来自Trametes sp. SQ01的漆酶和锰过氧化物酶按照不同比例加入染料体系中，研究该混合酶对染料脱色的能力，从而为染料废水的实际处理提供更为经济可行的依据。 1 材料与方法 1.1主要试剂 偶氮类染料刚果红和橙黄G，三苯甲烷类染料结晶紫、孔雀绿和甲酚红。 1.2 锰过氧化物酶（MnP）活性、漆酶（Lac）活性的测定 锰过氧化物酶（MnP）活性依照文献方法测定[5]。漆酶（Lac）活性依照文献方法测定[6]。每分钟转化 1 μmol 底物所需的酶量定义为一个酶活力单位。 1.3 混合酶脱色体系的建立 1.4 脱色率的计算 2 结果 2.1混合酶对结晶紫的脱色 如图1A 所示，当加入不同比例的混合酶后，Lac比例越大，混合酶对结晶紫的脱色效率越高，当MnP：Lac=1：10，脱色24 h时，脱色率达到74%，和单一酶Lac对结晶紫的脱色率相当；而当只加入MnP或加入MnP酶活力的比例高于Lac时，酶对结晶紫的脱色率较低。这说明在结晶紫的脱色过程中，Lac起主要作用。与单加入漆酶相比，反应开始10 h内， MnP：Lac=1：10的脱色率相对较高，由此可知，该当比例为MnP：Lac=1：10时，混合酶对结晶紫的脱色效果较好。 2.2混合酶对刚果红的脱色 在图1B中，混合酶中Lac的比例逐渐增大，其脱色能力也逐渐增强，当混合酶比例为MnP：Lac=1：10时，混合酶对刚果红的脱色率最高。当混合酶体系中只存在单一酶时，MnP对刚果红的脱色率在反应24 h后达到53%，稍高于lac。由此可见，在对刚果红的脱色过程中，Lac和MnP都起着重要作用。 2.3混合酶对橙黄G的脱色 在图1C中，与上述染料不同，单一酶漆酶对橙黄G的脱色率最高；混合酶或单一酶MnP在脱色反应开始2 h就得到了较高脱色率，尤其当两种酶比例为1∶1时达到了41.5%，但随后脱色率增长缓慢。综上说明，在橙黄G的脱色过程中，漆酶起着主要作用。在混合酶体系对橙黄G的脱色过程中，可能是Lac无法降解或者利用MnP对橙黄G的转化产物，从而导致混合酶脱色效率较低。 2.4 混合酶对孔雀绿的脱色 从图1D可以看出，当体系中漆酶所占比例较大时，混合酶对孔雀绿的脱色率较高，并且和单一酶漆酶对孔雀绿的脱色率相近，在脱色24 h后达到了将近100%；体系中MnP比例较高或只加入MnP时，混合酶体系对孔雀绿的脱色能力较弱，但混合酶的脱色能力仍高于MnP。这说明在混合酶体系对孔雀绿的脱色过程中，漆酶起着主要作用。 2.5混合酶对甲酚红的脱色 如图1F所示，随着Lac所占比例增加，对甲酚红的脱色率也逐渐提高，当脱色体系中只含有Lac时脱色率最高，24 h后脱色率为33%，这说明在甲酚红的脱色过程中，漆酶起着重要作用。和前四种染料相比，MnP和Lac单独或混合对甲酚红的脱色能力较弱，反应24 h后混合酶的脱色率在27%-31%之间，单一酶脱色率为27%-33%，说明该种染料不是混合酶的最佳底物。 3 讨论 到目前为止，也有很多关于MnP和Lac