秋水健脾散中β―谷甾醇与鸟苷HPLC法测定.docVIP

秋水健脾散中β―谷甾醇与鸟苷HPLC法测定 　　【摘 要】目的：采用HPLC法测定秋水健脾散中β-谷甾醇和鸟苷的含量。方法：Hypersil C18色谱柱（4.6 mm×150 mm，5 ?m）；流速：0.8 mLmin-1；流动相为甲醇-0.2%醋酸（75：25），检测波长：254 nm。结果：β-谷甾醇和鸟苷分别在0.0412～0.8240μg（r=0.9994）、0.0138～0.2840μg（r=0.9995）进样量与峰面积呈良好的线性关系，平均加样回收率分别为96.72%、98.63%，RSD（n=6）分别为1.21%、1.50%。结论：该方法测定结果准确、灵敏、重复性好。 【关键词】秋水健脾散；β-谷甾醇；鸟苷；梯度洗脱法 【中图分类号】R284.1 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484（2014）02-0741-02 秋水健脾散为中药复方制剂，源于卫生部药品标准中药成方制剂第九册，由姜半夏、莲子等十六味药物组成。原质量标准仅对个别药味进行了显微鉴别，未对方中的任何药味进行含量测定，为保证产品质量，确保临床疗效[1-2]，本文采用HPLC法对秋水健脾散中β-谷甾醇和鸟苷进行含量测定，实验结果表明该方法准确、可靠、方便、快速。 1 试药与仪器 LC-10ATVP型高效液相色谱仪；ANASTAR色谱数据工作站；β-谷甾醇对照品（批号为110851-200605）购于中国食品药品检定研究院；鸟苷对照品（批号为110722-200309，纯度≥98%）购于上海医药集团上海化学试剂公司；秋水健脾散（规格：每瓶装3g；批号为130906，1300915，130919）购于泉州中侨（集团）股份有限公司药业公司；甲醇、醋酸均为色谱纯。 2 方法与结果 2.1 β-谷甾醇和鸟苷的含量测定[3-7] 2.1.1 色谱条件及系统适应性 Hypersil C18色谱柱（4.6 mm×150 mm，5 ?m）；流动相为甲醇-0.2%醋酸（75：25）；检测波长：254 nm；流速为0.8 mLmin-1。在此条件下β-谷甾醇和鸟苷与其他组分分离效果良好，以鸟苷计理论塔板数应不低于2000。 2.1.2 对照品混合溶液的制备 精密称取β-谷甾醇对照品和鸟苷对照品各适量，加65%甲醇制成对照品混合溶液（β-谷甾醇为0.0412 mgmL-1，鸟苷为0.0138 mgmL-1）。 2.1.3 供试品溶液的配制 取本品适量，研细，取约4.0 g，精密称定，置50mL容量瓶中，加65%甲醇至刻度，超声处理（300W，20kHz）15 min， 用65%甲醇补足减失的重量，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。 2.1.4 阴性对照试验 按秋水健脾散处方比例称取适量除姜半夏的其余药味，按秋水健脾散的前处理和制剂生产工艺制成缺姜半夏的阴性样品，按照上述供试品溶液的配制方法制成缺姜半夏的阴性对照溶液。分别精密吸取10 uL的供试品溶液、对照品溶液及阴性对照溶液，按上述色谱条件进行色谱分析，结果供试品溶液色谱中，在与β-谷甾醇对照品和鸟苷对照品相同保留时间处有吸收峰，而阴性对照溶液在相同保留时间处未显吸收峰。 2.1.5 线性关系考察 精密吸取对照品混合溶液1，5，10，15，20 μL，按上述色谱条件进行测定，以峰面积积分值为纵坐标，β-谷甾醇、鸟苷量为横坐标分别绘制标准曲线，得回归方程。β-谷甾醇：Y=1.6891×106X-562.4，r=0.9994；鸟苷：Y=5.0164×106X+169.8，r=0.9995。结果表明β-谷甾醇在0.0412～0.8240μg进样量与峰面积线性关系良好；鸟苷在0.0138～0.2840μg进样量与峰面积线性关系良好。 2.1.6 精密度考察 取对照品混合溶液重复进样6次，按以上色谱条件测定β-谷甾醇和鸟苷的峰面积，结果表明，仪器具有良好的精密度，β-谷甾醇和鸟苷的RSD分别为0.39%、0.42%。 2.1.7 重复性考察 取同一批样品，按上述方法制备6份供试品溶液，分别测定其含量，β-谷甾醇和鸟苷的RSD分别为0.63%、0.66%。结果表明本方法具有良好的重复性。 2.1.8 稳定性考察 取同一供试品溶液，在放置0，1，2，4，6，8 h后精密吸取10 μL进样，测定其峰面积值，β-谷甾醇和鸟苷的RSD分别为0.55%、0.81%，供试品溶液8 h内基本稳定。 2.1.9 加样回收率试验 取已知含量（β-谷甾醇含量0.53 mgg-1、鸟苷含量0.18 mgg-1） 的同一批样品适量，研细，取约2.0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加对照品混