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蛋白快速银染试剂盒操作步骤及注意事项 货号：G0180 规格：20T 有效期：6个月有效。 产品内容： 试剂(A):SilverStain Sensitizer(500×) 2×1ml RT 试剂(B): Silver Stain(100×) 10ml RT 避光 试剂(C): Silver Stain Developer(5×) 2×100ml RT 避光 试剂(D):Silver Stain Stop Buffer(10×) 100ml RT 产品说明： 蛋白快速银染试剂盒(Protein Fast Silver Stain Kit)是一种快速的可用于SDS 或非变性PAGE等蛋白银染染色的试剂盒，该试剂盒含有增敏步骤，可明显降低背景。其优 点还在于：1、操作简单、快速；2、可用于2D凝胶的银染，并可进行后续的质谱检测；3、 目的条带清晰；4、不含甲醇。ProteinFastSilverStainKit与ProteinSilverStainKit 相比，前者操作速度更快，当检测灵敏度可能低于后者，尤其是在检测小分子量蛋白质的时 候。本试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。 自备材料： 1、 水平摇床或侧摆摇床 2、 去离子水(超纯) 3、 乙醇、冰乙酸 操作步骤(仅供参考)： 1、 准备工作：以下操作以8.5×5.5cm、厚度为1.0mm的凝胶为例，以凝胶全部浸没到溶液 为准，一般用量是25ml，对于凝胶体积较大的，各溶液的使用量需按凝胶体积比例放 大。整个银染过程应在摇床上进行，摇床转速控制在60～70rpm。提前配制固定液，即 按无水乙醇:冰乙酸:去离子水 5:1:4的比例配制。提前配制洗涤液，即按无水乙醇:去 离子水 1:4的比例配制。 2、 水洗：电泳结束后，取凝胶放入去离子水中清洗2次，每次5min。 3、 固定：取凝胶放入50～100ml固定液中，在摇床上室温摇动15～20min，重复固定步骤 1次。 4、 洗脱：取凝胶放入洗涤液中清洗2次，每次5min。 5、 水洗：去离子水清洗凝胶2次，每次5min。 6、 增敏：配制银染增敏工作液，即取Silver Stain Sensitizer (500×) 0.1ml加入到 50ml去离子水中，混匀，即1×Silver Stain Sensitizer，一般应2h 内用完。室温 下用1×Silver Stain Sensitizer孵育凝胶2min，立即用去离子水清洗凝胶2次，每 次1min。 7、 银染：配制银染工作液，即取Silver Stain(100×)0.5ml加入到50ml去离子水中， 混匀，即得 1×Silver Stain，一般应2h 内用完。取凝胶入 1×Silver Stain，在摇 床上室温摇动10～20min。 8、 水洗：弃液，在摇床上用去离子水清洗凝胶2次，每次30s，摇动速度在60～70rpm。 总的水洗时间应控制在 1.5min 内。 9、 显影：配制银染显影工作液，即取Silver Stain Developer(5×)10ml加入到40ml去 离子水中，混匀，即1×SilverStainDeveloper，一般应30min 内用完。清洗凝胶后， 立即置于1×Silver Stain Developer 中，室温孵育2～10min，直至蛋白条带清晰可 见。一般显色30s后就会出现棕色沉淀，继续显影2～3min，亦可延长至5min 以上， 如果显影效果不佳，可重新更换1×Silver Stain Developer继续显影。 10、迅速用去离子水清洗凝胶以避免显影过度，背景染色。立即加入银染终止液，摇床上 摇动10min，以终止显色反应。(配制银染终止液，即取SilverStainStopBuffer(10 ×)10ml加入到40ml去离子水中，混匀，即1×Silver Stain Stop Buffer，一般应 24h 内用完。) 11、保