三讲蛋白质的分子结构().pptVIP

蛋白质的分子结构 一、蛋白质的一级结构 二、蛋白质的二级结构和纤维状蛋白 三、蛋白质的三级结构 四、蛋白质的四级结构 蛋白质的分子量 蛋白质的20种氨基酸平均相对分子质量为约138 多数蛋白中较小氨基酸占优势，因此平均分子量约128 每形成一个肽键除去一分子水，因此氨基酸残基分子量128-18=110 蛋白质分子量估算：氨基酸残基数x110 蛋白质的构象 蛋白质是氨基酸连接成的多肽链。 每一种天然蛋白质都有自己特有的空间结构，这种空间结构称为蛋白质的（天然）构象（conformation）。 一、蛋白质的一级结构 1. 定义—— 1969年，国际纯化学与应用化学委员会（IUPAC） 规定：蛋白质的一级结构指蛋白质多肽连中AA的排列顺序，包括二硫键的位置。其中最重要的是多肽链的氨基酸顺序，它是蛋白质生物功能的基础。 2. 一级结构决定高级结构 3.蛋白质一级结构生物功能 1 )蛋白质一级结构举例： （1）胰岛素（Insulin） 一级结构决定空间构象及生物学活性 各种蛋白之间的差别是由氨基酸组成、氨基酸数目以及氨基酸在蛋白多肽链中的排列顺序决定的，这些决定了蛋白质的空间构象 4)蛋白质一级结构的测定步骤 A.测定蛋白质分子中多肽链的数目。 根据N-或C-末端残基的摩尔数及蛋白质的摩尔数确定 B.多肽链的拆分（多肽链或多亚基组成的蛋白质） 可用8mol/L尿素或6mol/L盐酸胍处理。 C.二硫键的断裂 过甲酸氧化 －S－S－ + HCOOOH → －SO3H 或β巯基乙醇还原。 D.分析多肽链的N-末端和C-末端。 肽链末端氨基酸分为两类：N-端氨基酸和C-端氨基酸。 DNS-Cl法：最常用，黄绿色荧光，灵敏度高。薄层层析，方法简便。 DNFB法：Sanger试剂，DNP-多肽，酸水解，黄色 DNP-氨基酸。有机溶剂（乙酸乙酯）抽提分离。纸层析、薄层层析、液相色谱等。 PITC法：Edman法，逐步切下。无色PTH-氨基酸，有机溶剂抽提，液相色谱分析。 多肽与肼在无水条件下加热，C-端氨基酸即从肽链上解离出来，其余的氨基酸则变成肼化物。肼化物能够与苯甲醛缩合成不溶于水的物质而与C-端氨基酸分离。 羧肽酶是一种肽链外切酶，它能从多肽链的C-端逐个的水解AA。根据不同的反应时间测出酶水解所释放出的氨基酸种类和数量，从而知道蛋白质的C-末端残基顺序。（Pro不能用此方法） 羧肽酶A：除Pro、Arg、Lys外的所有C端氨基酸 羧肽酶B：只水解Arg、Lys H2N… … Val—Ser—Gly E.多肽链断裂成多个肽段 可采用两种或多种不同的断裂方法将多肽样品断裂成两套或多套肽段，并将其分离开来。 F.分离肽段测定每个肽段的氨基酸顺序 肽段分离方法： ①电泳法 SDS②离子交换/凝胶过滤层析法 ③ＨＰＬＣ法 根据肽段的极性分离 每个肽段的氨基酸顺序的测定： Edman法（苯异硫氰酸酯法） 化学法：可获得较大的肽段 溴化氰(Cyanogen bromide)水解法，它能选择性地切割由Met的羧基所形成的肽键。 酶解法: 胰蛋白酶，糜蛋白酶，胃蛋白酶，嗜热菌蛋白酶等 G.确定肽段在多肽链中的次序。 利用两套或多套肽段的氨基酸顺序彼此间的交错重叠肽（overlaping peptide），拼凑出整条多肽链的氨基酸顺序。 16肽，N端H，Ｃ端Ｓ。 Ａ法裂解：ONS PS EOVE RLA HOWT Ｂ法裂解：SEO WTON VERL APS HO 重叠法确定序列：HOWTONSEOVERLAPS 二、蛋白质的二级结构与纤维状蛋白 已知一个蛋白质的多肽链在生物体内只有一种或很少几种稳定构象，这种构象称天然构象。 天然构象蛋白质具有生物活性，主链上的单键不能自由旋转。 1.肽键具有部分双键性质，不能绕键自由旋转 2.组成肽键的原子都处于同一个酰胺平面内。 蛋白质的二级结构(Secondary structure)： 多肽链借助氢键沿一维方向排列成具有周期性结构的构象，是多肽链局部的空间结构（构象）。主要有?-螺旋、?-折叠、?-转角等形式 氢键是稳定二级结构的主要作用力。 Secondary structure element:?-螺旋、?-折叠、?-转角、无规卷曲。 1.?-螺旋（?-helix） 最常见的二