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重组人肠激酶轻链的原核表达、纯化及活性分析.PDF
微生物学通报 NOV 20, 2012, 39(11): 1597−1602
Microbiology China © 2012 by Institute of Microbiology, CAS
tongbao@
研究报告
重组人肠激酶轻链的原核表达、纯化及活性分析
1 1 1 2 3 1*
钮利喜 李娇 吉雪雪 李霞 李彦军 杨斌盛
(1. 山西大学 化学生物学与分子工程教育部重点实验室 山西 太原 030006)
(2. 北京现代高达生物技术有限责任公司 北京 100176)
(3. 阿思克瑞普医药咨询(上海)有限公司 北京 100020)
摘 要: 【目的】在原核表达系统中实现人肠激酶轻链(Human enterokinase light chain,
hEKL)的表达和纯化。【方法】通过PCR 扩增得到编码hEKL 的基因片段, 利用基因重组技
术构建原核表达质粒pMAL-s-hEKL , 在 Escherichia coli 中进行诱导表达, 菌体经超声破
碎后利用Amylose 亲和柱对目标蛋白进行纯化, 并利用Tricine SDS检测酶的切割
活性。【结果】目的基因能够以可溶形式表达, 每升发酵液可纯化得到40 mg 纯度在97%
以上的 MBP-hEKL 蛋白, 活性检测表明该酶可以对含有肠激酶识别序列的蛋白进行特异
性切割, 酶活力达到6.0×105 U/ μmol 。
关键词: 人肠激酶轻链, 融合表达, 亲和层析, 活性分析
Expression, purification and activity analysis of human
enterokinase light chain from Escherichia coli
NIU Li-Xi 1 LI Jiao 1 JI Xue-Xue 1 LI Xia2 LI Yan-Jun3 YANG Bin-Sheng 1∗
(1. Key Laboratory of Chemical Biology and Molecular Engineering of Ministry of Education ,
Shanxi University, Taiyuan, Shanxi 030006, China)
(2. Beijing Modern Gaoda Biotechnology Company , Limited, Beijing 100176, China)
(3. Asklep China Incorporated , Beijing 100020, China)
Abstract: [Objective] To express and purify human enterokinase light chain (hEK ) in pro-
L
基金项目：山西省青年基金资助项目(No. 2011021035-5)
*通讯作者：Tel: 86-351-7018268; : nlx@
收稿
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