【精选】细胞生物学实验——上课用.docVIP

实验一 光学显微镜的使用 一、目的要求 1.了解普通光学显微镜的构造和原理。 2.掌握普通光学显微镜的正确使用和维护方法。 二、实验原理 成像原理：显微镜是根据透镜成像的原理，对微小物体进行放大的。 样品置于聚光镜与物镜之间，目镜、物镜、聚光器各自相当于一个凸透镜。平行的光线自反射镜折射入聚光器，光线经聚光器集聚增强，照射在标本上。样品的像经物镜放大成像，但像是倒像。目镜将此倒像进一步放大成像于人眼的视网膜上——正像。 三、实验用品 普通光学显微镜、擦镜纸、香柏油、二甲苯、标本片等。 四、内容与方法 普通光学显微镜由机械部分和光学部分和照明部分等三部分组成（图1-1） 1.机械部分： （1）镜座（Base）：在显微镜的底部，呈马蹄形、长方形、三角形等。 （2）镜臂（Arm）：连结镜座和镜筒之间的部分，呈圆弧形，作为移动显微镜时的握持部分。 （3）镜筒（Tube）：位于镜臂上端的空心圆筒，是光线的通道。镜筒的上端可插入接目镜，下面与转换器相连。镜筒的长度一般为160mm。显微镜分为直筒式或斜筒式；有单筒式的，也有双筒式的。 （4）转换器（Nosepiece）：位于镜筒下端，是一个可以旋转的圆盘。有3~4个孔，用于安装不同放大倍数的接物镜。 （5）载物台（Stage）：是支持被检标本的平台，呈圆形或方形。中央有孔可透过光线，台上有用来固定标本的夹子和标本移动器。 （6）调焦旋钮：包括粗调焦旋钮（Coarse adjustment knob）和细调焦旋钮（Fine adjustment knob），是调节镜筒或载物台上下移动的装置。 2.光学部分：由物镜、目镜、聚光器等部分组成。 显微镜的重要性能参数是分辨率的大小（即镜头能判别物质两点间最小的距离D）。D越小，表示分辨率越高。 D= 普通光学显微镜能分辨率直径为0.2μm以上的物体。大部分细菌直径在0.5μm以上，故用油镜就能看清其个体形态。 （2）目镜起放大镜的作用，经物镜放大的实像作进一部放大。低倍物镜下的视野深度与面积比高倍镜下大。故常用低倍镜寻找载玻片上的目标。观察的物体的工作距离与光圈大小之间的关系。 3.照明部分 （1）反光镜：载物台下方，镜柱前面的一个圆镜。一面为平面，一面为凹面。平面镜聚光力弱，适于强光源和平行光源。凹面镜聚光力强，适用于弱光源和散射光源。反射镜的方位可以随意调节。 （2）聚光器由聚光镜和可变光阑组成。聚光器边框上的数字代表其最大的数值孔径，其作用是把光线聚集在标本上，增强照明度。可变光阑是用以调节光强和聚光器数值孔径大小的，使物镜和聚光器的数值孔镜相符合。如果光圈开得太大，超过物镜的数值孔径，就会产生光斑；如果光圈开得太小，则分辨率下降，反差增大，都会降低物像的清晰度。 五、显微镜的使用指南 1.移动显微镜时要一手握持镜臂，一手托着镜座。 2.使用时，应通过调整凳子高度，以便能舒适地观察，勿将显微镜倾斜。 3.在观察标本时，应两眼同时睁开，这样既能同时绘图，又能减少疲劳。 4.调焦应细心，应采取将物镜调离标本的办法。 5.用低倍镜时，光圈要适当缩小，以获得较好的对比度。随着放大倍数的增大，所需要光的量也要加大。 6.镜检时，应首先用低倍镜进行调焦，再换高倍镜，最后用油浸镜进行观察。 7.保持载物台清洁、无油。除油浸外，其它物镜不得接触香柏油。 8.所有透镜应保持清洁，只能用擦镜纸擦拭镜头，不得用手触摸透镜。 9.结束后，取下标本片，将油浸镜上的浸油擦拭干净，盖上防尘罩，放回箱内。 10.显微镜发生故障，应立即向指导教师汇报，未经同意，不得随便更换显微镜。 六、思考题 1.使用显微镜应注意哪些事项？ 2.提高显微镜分辨率的方法有哪些？ 3.镜检标本时，为什么要先用低倍物镜观察？ 实验二 细胞凝集反应 一、实验目的 1.学习植物凝集素的提取方法。 2.观察红细胞凝集现象。 二、实验原理 细胞外被是指细胞质膜外表面的一层粘多糖物质，它在细胞间的联系和识别、细胞的生长和分化、免疫反应和肿瘤发生等过程中发挥重要作用。 动物细胞表面的糖蛋白、糖脂中的糖链伸向膜的表面，它们是细胞识别、细胞免疫及细胞接触抑制现象的必要组分。 凝集素是一类含糖的（少数例外）并能与糖专一结合的蛋白质，它具有凝集细胞和刺激细胞分裂的作用。凝集素使细胞凝集是由于它与细胞表面的糖分子连接，在细胞间形成“桥”的结果。凝集素与糖分子结合有一定的专一性和结合性，并与细胞膜上受体的分布有关。 实验用品 自己归纳总结 四、实验方法 1.提取凝集素：称取土豆去皮块茎20g，加100ml PBS缓冲液，浸泡2h后，将浸出的粗提液过滤，即为含有可溶性的土豆凝集素。 2.用滴管吸取土豆凝集素和2％的红细胞悬液各1滴，置于双凹片上，充分混匀，静置