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人体解剖与组织胚胎学专业毕业论文 [精品论文] 5-脱氧杂氮胞苷诱导肝癌细胞系分泌exosomes及相关免疫分子的研究 关键词：肝癌 5-脱氧杂氮胞苷 exosomes 生物学特性 抗肿瘤活性 肿瘤疫苗 摘要：exosomes是由细胞内的多泡体(multivesicularbody，MVB)与细胞膜融合后，释放到细胞外环境中的一种膜性囊泡。exosomes重要的特性是可表达来源细胞的各种功能蛋白，肿瘤细胞来源的exosomes(tumor derived exosomes，TEX)，含有肿瘤相关抗原如MAGE、NY-ESO-1分子，及抗原提呈过程中的分子伴侣-热休克蛋白(heat shock protein，HSP)等。因此，exosomes可作为新的肿瘤抗原，诱发和增强机体的免疫反应，成为一种新型的具有免疫原性的非细胞性肿瘤疫苗。 目的：用5-脱氧杂氮胞苷(5-Aza-de-oxycytidine，5-Aza-CdR)诱导肝癌细胞分泌exosomes，探讨其生物学特性、免疫学功能及其负载的免疫相关分子的抗肿瘤活性，以期成为理想的抗肝癌的肿瘤疫苗，为研制具有临床应用前景的高效非细胞性肿瘤疫苗提供新思路。 方法：选取两种肝癌细胞株：HepG2细胞和Hep3B细胞，分别收集5-Aza-CdR诱导前后的两种细胞培养上清液，分别进行离心超滤联合蔗糖密度梯度离心，提取出exosomes。用透射电镜观察其超微结构，用Western Blot法，检测exosomes上HSPT0，HLA-Ⅰ和NY-ESO-1分子的表达。用BCA蛋白测定法测定exosomes的蛋白浓度，计算exosomes的总蛋白含量。通过RT-PCR检测两种细胞野生型p53的表达。 结果：经5-Aza-CdR诱导后，肝癌细胞HepG2细胞和Hep3B细胞分泌exosomes的数量均增加(P＜0.05)，其负载的HSP70，HLA-Ⅰ和NY-ESO-1分子表达明显增高(P＜0.05)，exosomes总蛋白含量明显增高(P＜0.05)，野生型p53基因mRNA表达增高(P＜0.05)。 结论：5-Aza-CdR可诱导HepG2细胞和Hep3B细胞分泌的exosomes数量增多，其机制可能与活化p53基因后，促进exo-somes的生成有关。5-Aza-CdR可上调HSP70分子的表达，而HLA-Ⅰ、NY-ESO-1分子的上调则是通过DNA去甲基化途径实现的。本研究为肝癌细胞来源的exosomes最终研制成为肿瘤疫苗奠定了实验基础。  正文内容 exosomes是由细胞内的多泡体(multivesicularbody，MVB)与细胞膜融合后，释放到细胞外环境中的一种膜性囊泡。exosomes重要的特性是可表达来源细胞的各种功能蛋白，肿瘤细胞来源的exosomes(tumor derived exosomes，TEX)，含有肿瘤相关抗原如MAGE、NY-ESO-1分子，及抗原提呈过程中的分子伴侣-热休克蛋白(heat shock protein，HSP)等。因此，exosomes可作为新的肿瘤抗原，诱发和增强机体的免疫反应，成为一种新型的具有免疫原性的非细胞性肿瘤疫苗。 目的：用5-脱氧杂氮胞苷(5-Aza-de-oxycytidine，5-Aza-CdR)诱导肝癌细胞分泌exosomes，探讨其生物学特性、免疫学功能及其负载的免疫相关分子的抗肿瘤活性，以期成为理想的抗肝癌的肿瘤疫苗，为研制具有临床应用前景的高效非细胞性肿瘤疫苗提供新思路。 方法：选取两种肝癌细胞株：HepG2细胞和Hep3B细胞，分别收集5-Aza-CdR诱导前后的两种细胞培养上清液，分别进行离心超滤联合蔗糖密度梯度离心，提取出exosomes。用透射电镜观察其超微结构，用Western Blot法，检测exosomes上HSPT0，HLA-Ⅰ和NY-ESO-1分子的表达。用BCA蛋白测定法测定exosomes的蛋白浓度，计算exosomes的总蛋白含量。通过RT-PCR检测两种细胞野生型p53的表达。 结果：经5-Aza-CdR诱导后，肝癌细胞HepG2细胞和Hep3B细胞分泌exosomes的数量均增加(P＜0.05)，其负载的HSP70，HLA-Ⅰ和NY-ESO-1分子表达明显增高(P＜0.05)，exosomes总蛋白含量明显增高(P＜0.05)，野生型p53基因mRNA表达增高(P＜0.05)。 结论：5-Aza-CdR可诱导HepG2细胞和Hep3B细胞分泌的exosomes数量增多，其机制可能与活化p53基因后，促进exo-somes的生成有关。5-Aza-CdR可上调HSP70分子的表达，而HLA-Ⅰ、NY-ESO-1分子的上调则是通过DNA去甲基化