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人体解剖与组织胚胎学专业毕业论文 [精品论文] 两种精子优选法对精子DNA结构完整性及其它因素的影响 关键词：精子优选法 Sperm密度梯度离心法 改良巴氏染色 精子染色质 结构完整性 人类辅助生殖 摘要：目的：上游法和Pure Sperm（硅烷化硅胶悬浮液）密度梯度离心法是广泛使用于人类辅助生殖技术中的两大精子优选技术，两种技术均可优选出高质量的精子，但对精子DNA结构完整性优选的确切效果报道较少，本实验拟采用精子染色质结构分析法，对未处理精子、以及经上游法和Pure Sperm法处理后的精子进行DNA完整性检测，并对精子其它参数进行检测，以综合评价两种优选方法对正常密度精子及低密度精子的优选效果，为不同精液选用优选方法提供相应实验依据。 方法：随机抽取2007年10月～2008年6月重庆市妇产科医院遗传与生殖研究所不育症男性精液标本60份，30份为正常密度精子精液（A组），其中30份为低密度精子精液B组。①上游法：将液化精液、精子培养液按1：2的比例混合、离心2次，后以斜放37℃温箱中静置30至60min，吸取上层云雾状液体备用。②Pure Sperm法：在一试管内依次加入80％ Pure Sperm、40％ Pure Sperm、液化精液之后离心弃上清，加入培养液混匀、离心两次后吸取、重悬底部精子备用。③按WHO推荐的标准方法对优选前后两组精液作精子密度计数，以及活率、活力的检测。④优选前后精子运动参数采用计算机辅助精液分析（CASA）进行检测。⑤改良巴氏染色法观察两组精液优选前后精子形态及畸形率的变化。⑥精子染色质结构分析法（SCSA）检测优选前后精子DNA结构完整性的变化。 结果：①优选处理后精子密度明显下降（Pamp;lt;0.01），以上游法下降更为显著；精子活率、a级精子数量在优选后明显提高（Pamp;lt;0.01），其中上游法比Pure Sperm法提高更明显（Pamp;lt;0.01），A组精液与B组精液优选前具有明显差异（Pamp;lt;0.01），而优选后则无差异（Pamp;gt;0.05）。②优选处理后，精子平均轨迹速度（VCL）、精子向前平均直线运动速度（VSL）、精子平均路径速度（VAP）、精子直线性（LIN）、精子运动前进性（STA）等指标均有明显上升；而两种优选方法进行比较，仅VCL等少数参数具有统计学意义；A组精液与B组精液各运动参数比较，VCL、VSL、VAP等三项指标具有统计学意义（Pamp;lt;0.05），其余未见明显差异。③优选后，正常形态精子数量显著增加（Pamp;lt;0.01）；经Pure Sperm法处理后小头、梨头、双头、尾部等畸形精子数量下降明显（Pamp;lt;0.05）；经上游法处理后单纯空泡头、尾部畸形精子数量减少最为明显（Pamp;lt;0.05）。④被吖啶橙染成绿色（DNA结构完整精子）的精子数量在优选处理后明显上升，而两种优选法所得结果之间进行比较，未见明显差异（Pamp;gt;0.05）。⑤精子DNA受损可使精子密度、活率、活力下降，c级、d级精子数量明显增多；使VCL、VSL、VAP等参数下降；使小头、小头合并尾部、梨形头、锥形头等头部畸形以及颈部畸形精子数量增加。 结论：上游法与Pure Sperm法处理后DNA结构完整的精子数量较优选前明显提高，但两种方法之间无明显差异；结合两种方法对精子其它参数的不同影响可知，精子密度低或伴有大头、双头畸形者，可选用Pure Sperm法进行精子优选，而精子密度正常者则可选用上游技术。  正文内容 目的：上游法和Pure Sperm（硅烷化硅胶悬浮液）密度梯度离心法是广泛使用于人类辅助生殖技术中的两大精子优选技术，两种技术均可优选出高质量的精子，但对精子DNA结构完整性优选的确切效果报道较少，本实验拟采用精子染色质结构分析法，对未处理精子、以及经上游法和Pure Sperm法处理后的精子进行DNA完整性检测，并对精子其它参数进行检测，以综合评价两种优选方法对正常密度精子及低密度精子的优选效果，为不同精液选用优选方法提供相应实验依据。 方法：随机抽取2007年10月～2008年6月重庆市妇产科医院遗传与生殖研究所不育症男性精液标本60份，30份为正常密度精子精液（A组），其中30份为低密度精子精液B组。①上游法：将液化精液、精子培养液按1：2的比例混合、离心2次，后以斜放37℃温箱中静置30至60min，吸取上层云雾状液体备用。②Pure Sperm法：在一试管内依次加入80％ Pure Sperm、40％ Pure Sperm、液化精液之后离心弃上清，加入培养液混匀、离心两次后吸取、重悬底部精子备用。③按WHO推荐的标准方法对优选前后两组精液作精子密度计数，以及活率、活力的检测。④优