实验一 海胆受精作用和早期发育模式.ppt

一、目的要求 掌握诱导海胆配子排放、人工授精技术； 了解水生动物培养的基本技术； 通过活体观察，加深对海胆早期 形态发育模式的理解 二、实验材料 虾夷马粪海胆 Strongylocentrotus intermedius （四）、精子的凝集 卵水可激活海胆精子并引起精子凝集 作 业 电子版上交海胆未受精卵、受精卵、卵裂、囊胚、原肠胚、棱柱幼虫 各期照片；精子凝集； 以表格的形式提交海胆胚胎及幼虫的发育时序（注意水温），并对主 要发育阶段（卵裂期、囊胚、原肠胚、棱柱幼虫）进行绘图； 思考：KCl诱导原理,还有哪些方法可以诱导生殖；多精入卵原因； 选择提交：海胆在不同温度（室温、4℃）下的精子活力 * 实验一 海胆的受精作用和 早期发育模式 · 配 子 的 获 得 · 受 精 作 用 · 胚胎和幼虫发育 · 精子的凝集 配子获得 → 人工授精 → 培养和观察 三、内容及方法 (一）、配子的获得 1、0.5M KCl诱导海胆排放生殖细胞 操作方法： 海胆口面围口膜处（牙齿和外壳之间）注入体腔中（分多个点注射），1～2 ml 反口面 （卵子为橙黄色，精液为乳白色） 雌 雄 卵子：海水浸没生殖孔； - 大部分卵子用于受精和培养， - 少部分用于制作卵水 精液：干精、低温保存（冰上或4℃）； 用于制备精子悬液和精子凝集实验 雌 雄 2、配子的收集 显微镜下观察并拍照 - 确定卵子成熟情况（核的有无）、卵外胶膜（滴加墨汁）； - 精子运动，比较海水激活前后精子活力变化 精子悬液：10ml海水中加1滴干精 3、卵子和精子悬液观察 选择实验：温度（室温、4℃）对海胆精子活力的影响 （二）、人工授精 卵子至少需洗涤2次以除去水中的体腔液和其他杂质 适宜的精卵比例，镜检：数个精子/卵子 观察并记录受精膜起始举起和完全举起的时间 精子过多 精子过少 （三）、胚胎发育 培养方法： 受精膜完全举起后洗卵2-3次； 孵化前可添加适量过滤海水；密度﹤10 ind./ml 孵化后选幼 （约受精后12h；密度﹤2 ind./ml） 幼虫培养期间换水（1-2次/天，1/3/次） 棱柱幼虫后开始投喂单细胞饵料，投喂量以水色为淡藻色为宜 观察：定期记录各发育阶段形态和速度 孵化前 辐射全裂 （第四次卵裂） 腔囊胚 内陷法为主的原肠胚形成 棱柱幼虫 （摄食） 长腕幼虫 变态 卵水制作：将未受精卵放入盛有一定海水（10ml）的试管里（铺满底部），塞住试管口，激烈摇动以去除未受精卵外的胶膜，过滤得滤液即为卵水 滴加精子悬液到卵水中（精子悬液：卵水 = 1：3） 镜下观察精子活动、凝集 * 待卵子沉底后（约30min），采用倾倒法洗卵。 CROSS SECTIONAL VIEW: Yellow is ectoderm, orange is endoderm, red is primary mesenchyme cells and skeleton, orange dots are secondary mesenchyme cells. Process from blastula to pluteus takes about 48 hours. Note: Anus is formed before the mouth. This animation traces the development of the sea urchin from the single fertilized cell to the baby sea urchin. Some of the steps along the way: At the forth division the micromeres form The swimming blastula hatches Gastrulation forms the mouth from the anus Prism stage. Embryo starts to feed Early Pluteus, about 3 days from start Late Pluteus, about one week Metamorphosis happens at several months Producing the baby sea urchin 反口面向上静置数分钟（1-5min）；5个生殖孔 如果卵子排放量大，需及时转移至其他容器中。 精液在10℃下可保存数小时，