固定化酶应用.pptVIP

酶的固定化应用 目录 一、医学和临床分析 二、固定化酶在工业生产中的应用 三、在分析检测中的应用 一、医学和临床分析 消血栓： 纤溶酶是异源蛋白质，在人体内引起免疫反应，无法长期使用。酶的不稳定性使其在较短的时间内失活。 用包埋法制备的酶固定化技术可克服上述弊端，酶在囊中不能漏出，小分子物质能自由进出。 (1)氨基酰化酶Aminoacylase 首例，1969年，日本田边制药公司，DEAE-葡聚糖凝胶固定化酶,拆分DL-乙酰氨基酸，连续生产L-aa，成本降低40%左右。 (2)葡萄糖异构酶 最有名的，也是规模最大的过程，就是采用固定化葡萄糖异构酶，从葡萄糖生产高果糖浆。 其它还包括： 采用固定化乳糖酶去除牛乳中的乳糖、 采用固定化脂肪酶通过转酶反应生产可可油替代品 采用固定化耐热蛋白酶制造甜味剂-天冬甜精 以及应用固定化I广天冬酶从富马酸铵生产天冬氨酸等。 三、在分析检测中的应用 1）酶传感器 固定化酶和电化学传感器的结合。酶传感器：固定化酶+能量转换器(电极、场效应管、离子选择场效应管)，属于生物传感器的一种。 用途:临床诊断、工业发酵过程控制、环境监测 优点： ①既有不溶性酶体系的优点，又具有电化学电极的高灵敏度； ②酶的专一反应性，使其具有较高的选择性，能够直接在复杂试样中进行测定。 1967年Updike等采用酶的固定化技术，将葡萄糖氧化酶固定在疏水膜上，然后再和氧电极结合，组装成了世界上第一个生物传感器——葡萄糖氧化酶电极。 3）水质监测 用化学法测定酚时，硫化物、油类等可干扰其测定。 从马铃薯中提纯、经吸附交联得到的固定化多酚氧化酶与氧电极构成酚传感器，可检测大多数酚类化合物。 大多数鱼死后5～20h，ATP，ADP和AMP已分解尽，超过24h，鲜度主要取决于IMP--肌苷---次黄嘌呤---尿酸。 将这三个步骤的三种酶（5’－核苷酸酶、核苷磷酸化酶、黄嘌呤氧化酶）固定在氧电极上，制成鱼鲜度测定仪。 当K20时，鱼极新鲜，可供生食。 当K在20～40之间为新鲜，必须熟食。 当K40，不新鲜，不宜食用，这与嗅觉检验结果相一致。 5）肉鲜度传感器 用腐胺氧化酶与过氧化氢电极构成多胺生物传感器，或用单胺氧化酶膜和氧电极组成的酶传感器测定肉在贮藏过程中的鲜度。 肉类在腐败过程中会产生各种胺类，故胺类测定能反映肉类的新鲜程度。 * * 成员：汤秋冶 程克文 人工肾： 原理：将病人血液中的尿素经脲酶水解成氨，再用活性炭吸附。即：用固定化脲酶和微胶囊活性炭组成人工肾。 人工肾是一种替代肾脏功能的装置，主要用于治疗肾功能衰竭和尿毒症。它将血液引出体外利用透析、过滤、吸附、膜分离等原理排除体内过剩的含氮化合物、新陈代谢产物或逾量药物等，调节电解质平衡，然后再将净化的血液引回体内。 乙酰 -DL — 氨基酸 L — 氨基酸 +乙酸 乙酰 -D — 氨基酸 氨基酰化酶 二、固定化酶在工业生产中的应用 泵 储 罐 反应产物 离心机 消旋反应器 固定化酶柱子 晶体 L-Ala L-Ala A-D-Ala A-L-Ala A-D-Ala 微生物传感器 组织传感器 细胞器传感器 酶传感器 免疫传感器 传感器 葡萄糖酶电极 酶电极示意图 ?－D－葡萄糖＋O2 D－葡萄糖酸－1，5－内酯＋H2O2 半透膜 酶胶层 感应电极 酶传感器工作原理示意图 酶传感器主要由固定化酶膜和变换器组成： 固定化酶膜：选择性地“识别”并催化被检测物质发生化学反应； 变换器：把催化反应中底物或产物的变量转换成电信号，通过仪表显示出来。? Glucose Gluconic acid Glucose oxidase Oxygen Hydrogen peroxide Membrane Electrode 根据反应中消耗的O2、生成的葡萄糖酸和H2O2的量，可以用氧电极、pH电极和H2O2电极来测定葡萄糖的含量。 2）医疗方面 葡萄糖传感器和血糖测定仪 用葡萄糖氧化（glucoseoxidase,GOD）制成葡萄糖传感器，可测定血液中葡萄糖浓度。 手掌型葡萄糖(glucose)分析仪 德国研发的环境废水BOD分析仪 4）鱼鲜度传感器 在日本、加拿大等国广泛用于鱼类鲜度的测定。鱼死后体内ATP经酶解依次形成ADP、AMP、IMP、肌苷、次黄嘌呤和尿酸。鲜度可用K值表示： K=肌苷+次黄嘌呤/ ATP +ADP+AMP+IMP +