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木质部内腐烂病菌生长扩展动态的研究1试验材料与方法1.1孢子的制备苹果树腐烂病菌(Valsamali)LXS080901菌株，于陕西省富士苹果枝条上采集病组织，为青岛农业大学植物病害流行实验室单胞子器分离保存于4℃冰箱中。用农杆菌介导转化法(ATMT)将携带潮霉素B磷酸转移酶基因(hph)和绿色荧光蛋白表达基因(gfp)转入腐烂病菌，获得转化子LXS080901-16。经离体和活体的接种试验，转化子LXS080901-16和LXS080901在苹果枝干上都能导致典型的腐烂病症状，二者的致病性无差异，与田间自然发病症状没有差异。苹果树腐烂病菌PDA培养基上活化后，用0.5cm打孔器打取边缘新鲜菌丝，取20块置于大麦粒培养基中25℃黑暗培养15天左右即可产生大量分生孢子器。将产孢的大麦粒放于1%琼脂保湿，2天后分生孢子器即可溢出黄色分生孢子角。1.2腐烂病菌在木质部内的扩展动态3月下旬在青岛农业大学胶州示范园选取3年生富士苹果的1~2枝条，距基部20cm处剪除枝条形成剪口，修剪当天接种。用灭菌牙签挑取新鲜孢子角涂于木质部中央而不接触韧皮部，用湿脱脂棉包裹，塑料膜包扎保湿，7天后揭除包扎膜。并标记。接种后每个月剪取6个接种枝条，并截切成0.5cm茎段，用PDA分离每个茎段内的腐烂病菌，并在荧光显微镜下观察是否为接种病菌，以此推断腐烂病菌在苹果枝条木质部内的扩展速度。1.3不同龄期剪口木质