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梅毒螺旋体的血清学检测方案 问题 Q1：实验室诊断梅毒的两类血清学检测方法是什么？ Q2：为什么需要这两类血清学检测方法？ 梅毒血清学检测分类 非梅毒螺旋体抗原血清学试验 （非特异性梅毒抗体） 包括：RPR、TRUST等 梅毒螺旋体抗原血清学试验 （特异性梅毒抗体） 包括：TPPA、TP-RT、ELISA、CLIA等 非梅毒螺旋体抗原血清学试验(RPR、TRUST) 原理（抗心磷脂抗体）： 人体感染了梅毒螺旋体后，组织受到破坏，释放出来的一种类脂成分，与梅毒螺旋体结合形成完全抗原，刺激机体产生类脂质抗体（反应素）。 主要是IgM和IgG混合抗体。 非梅毒螺旋体抗原血清学试验 抗体产生时间 感染3周-4周，硬下疳出现1周-2周 一般在感染后5～7周（或硬下疳出现后2～3周）产生。（郭红亮 ，《中外健康文摘》2010年第20期） 抗体作用 无保护作用，治疗监测。未经治疗的病人，其血清内的反应素可长期存在。经正规治疗后，反应素可以逐渐减少至转为阴性。 Q3：临床上非梅毒螺旋体抗原血清学试验为什么有定性和定量两种检测方法 原理和方法 反应原理 抗原抗体结合形成复合物，凝集成网状沉淀颗粒被肉眼所见 抗原基本成分 心磷脂、卵磷脂和胆固醇 方法包括： 快速血浆反应素环状卡片试验(RPR) 不加热血清反应素(USR) 甲苯胺红不加热血清试验（TRUST） 性病研究实验室试验(VDRL)等。 检测流程 操作步骤： 将检测试剂盒从冰箱中取出，室温放置30分钟。 测RPR自动旋转仪转速。 在RPR纸卡上编上相应的待检样本的编号。 检测流程（定性） 加样： 吸取50μl血清（浆）放在卡片圈中，并均匀地涂布在整个圈内。 加抗原： 将抗原轻轻摇匀，用试剂盒提供的针头加1滴抗原。 反应： 将卡片置梅毒自动旋转仪8分钟立即在亮光下观察结果。 检测流程（定量） 稀释液准备： 在圈内加入50μl生理盐水（根据需要确定稀释度），勿将盐水涂开。 加样： 吸取50μl血清(浆)与各圈中盐水作系列稀释，并涂布满整个圈内。 重复定性试验后两步。 临床意义 早期梅毒硬下疳出现1周-2周后，血清可呈阳性。 【感染5～7周（或硬下疳出现后2～3周）】 经治疗后血清滴度可下降并阴性，故可作为疗效观察、判愈、复发或再感染的指征。 假阳性问题 假阳性：非梅毒患者的血清反应呈阳性 ①技术性假阳性 由于标本的保存不当（如细胞污染或溶血）、试剂质量差或过期、或实验室操作错误所造成。 ②生物学假阳性 是由于患者有其他疾病或生理状态发生变化，使梅毒血清试验出现阳性 急性生物学假阳性反应的疾病 风疹 水痘 传染性单核细胞增多症 传染性肝炎 上呼吸道感染 肺炎球菌性肺炎 病毒性肺炎 牛痘疹 慢性生物学假阳性反应的疾病 系统性红斑狼疮 自身免疫性溶血性贫血 盘状红斑狼疮 结节性多动脉炎 类风湿性关节炎 桥本氏甲状腺炎 风湿性心脏病 干燥综合征 毒品瘾者 慢性肾炎 肝硬化 老年 麻风 (是唯一产生慢性生物学假阳性的感染性 疾病) 妊娠的假阳性反应 这是一种生理情况下的生物学假阳性 假阳性发生率较低有报告为0.4%，滴度低。 假阳性问题 梅毒假阳性反应的处理 1. 技术性假阳性反应一般是由于操作错误引起的假阳性反应，经过重复试验即可除外。 对急、慢性生物学假阳性反应，应做TPPA等梅毒螺旋体抗原血清学试验（特异性梅毒抗体）试验进行排除。 前带现象 原理 指二期梅毒患者非梅毒螺旋体抗原血清试验中，有时血清中存在高浓度的抗体时出现的弱阳性、不典型或阴性反应的结果。 处理 将血清稀释后再进行试验。 血清固定 耐血清性（血清固定） 指经抗梅毒治疗后，非梅毒螺旋体抗原血清试验在一定时期内不阴转。早期的耐血清性常与治疗量不足或不规则治疗、复发、再感染或有神经系统梅毒等因素有关。 梅毒螺旋体抗原血清学试验 （特异性梅毒抗体） 包括：TPPA、TP-RT、ELISA、CLIA等 试验原理 检测血中特异性抗梅毒螺旋体特异蛋白为抗原的抗体（ IgG 和IgM ）。 特异性IgM型抗梅毒螺旋体抗体，感染2周后即可测出。 Q3：梅毒螺旋体抗原血清学试验的定量试验在梅毒诊疗中有意义吗？ TPPA/TPHA TPPA试验原理与TPHA试验基本相同 TPPA试验用梅毒螺旋体致敏明胶颗粒 TPHA试验中梅毒螺旋体致敏羊红细胞 特点 梅毒螺旋体全抗原 TP-ELISA/CLIA 原理 ELISA:用重组梅毒螺旋体抗原包被固相板条，加上梅毒血清和单克隆抗体酶标记物，形成抗原抗体复