长效蛋白及多肽药物研究进展.doc

长效蛋白及多肽药物的研究进展 王韬 生物学基地班 随着生物技术的迅猛发展、生物制品的大面积研发和应用，以蛋白和多肽为主的生物技术药物已广泛应用于临床。这些药物主要应用于癌症、传染性疾病、艾滋病在内等多种疾病的治疗，与同传统的化学合成药物相比，该类药物由于是通过基因工程制备的，其结构与天然来源蛋白结构相同，与体内正常生理物质十分接近，药理活性高。但由于这种药物为异原性蛋白，在机体内具有很强的免疫原性，容易被机体免疫系统识别并清除，导致药物在血浆中半衰期缩短。为了维持药物的疗效需要大剂量反复用药，长期的频繁注射给患者带来了不便和经济上的巨大负担。因此临床上需要研制长效的蛋白药物，长效蛋白质和多肽药物的研究不但能解决上述现有药物所存在的给药问题，而且能推动新的蛋白质和多肽药物的应用开发，使一些由于半衰期短、副作用大而无法进入实际应用的药物获得理想的临床效果（如抗肿瘤药等），从而为人民身体健康带来福音。本文主要对影响蛋白酶长效性的主要因素以及目前国内外关于研究长效药物的主要方法进行综述。 1.影响蛋白质和多肽药物长效性的主要因素 1.1蛋白酶因素的影响 当药物进入系统时，由各种酶引起的代谢，尤其是多种形式的蛋白水解酶的作用，可导致药物降解为小分子肽或者氨基酸。这类酶广泛存在于胃、肠道、肝脏和肾脏等器官中，其分布具有细胞组织的特异性。 1.2蛋白质物理或化学上的性质变化 物理变化包括聚合、沉淀；化学变化包括氨基酸残基的修饰，主要有氧化作用、还原作用、脱酰胺反应、水解反应、β消除、二硫化物交换等几种反应，并且蛋白质在构建中的稳定性和免疫原性以及导致蛋白质化学结构错误变化的环境条件也被认为是影响蛋白质代谢稳定性的主要因素。 1.3受体介导的清除 较大的多肽常通过受体介导的方式来清除，有不少例子显示，受体介导的清除可能是一种主要的清除机制。例如胰岛素，若减少与受体的亲和力就会显著提高其血浆半衰期。受体介导清除的限速步骤是药物与细胞表面受体形成非共价物的过程。受体清除具有细胞特异性。 1.4肾脏的过滤消除 蛋白质与多肽药物极易被肾小球滤过，因而其在体内的消除主要是通过肾脏完成的。肾小球的滤过作用主要取决于药物分子大小(水化半径)和所带电荷。分子量小于20kD的细胞因子、激素等小分子蛋白肾小球滤过时几乎没有阻力。而且与小分子化学药物不同，蛋白药物一般不具有脂溶性。因而不能被肾小管重吸收，只能以原药形式或被肾小管中的蛋白酶D降解后以降解产物形式从尿中排出。这不仅明显缩短了药物的半衰期，而且会产生剂量相关的肾毒性。 2.蛋白质和多肽药物获得长效性的研究方法 长效蛋白的主要研究策略是在尽可能保持蛋白原有生物活性的基础上，增加蛋白在溶液中的水化半径。现有的方法有水溶性大分子多聚物(如聚乙二醇、葡聚糖等)修饰、与大分子蛋白融合、增加蛋白的糖基化程度、增加血浆蛋白结合率等。另外，降低蛋白的溶解性，使其注射后形成不溶性沉淀和去除受体介导清除蛋白的受体识别位点等方法，也可以达到延长蛋白药物体内半衰期的目的，但后两种方法是建立在特定蛋白特性基础上的，一般不适合于其他蛋白。 2.1化学修饰 化学修饰是延长蛋白药物半衰期的一个有效途径，其中应用最为广泛的修饰剂是聚乙二醇(PEG)。糖基修饰也是获得蛋白药物长效性的有效方法，并且能保持蛋白药物天然构象。此外还有酰基化修饰等化学修饰。 2.21聚乙二醇(PEG)修饰 PEG是由乙二醇单体[HO-(CH2CH2O)n-CH2-CH2–OH]聚合而成的一种无毒、高亲水性的大分子聚合物。PEG及其衍生物由于具有下述的优良性能而在化学修饰中应用最多: (a) 增大蛋白质药物的分子量，减少被肾小球过滤的频率，提高药物在体内的半衰期；(b)保护蛋白质免受蛋白酶的降解；(c)屏蔽外源性蛋白质的免疫原性，减少副作用；(d)蛋白质被修饰后仍能保持一定的活性，通过在体内长时间循环，起到稳定的治疗效果；(e)适当的修饰产物能在体内水解，缓慢释放出药物，不但能使蛋白质药物恢复其活性，而且能长时间保持血液内的药物有效浓度；(f)聚乙二醇是FDA已经批准的药用材料，只要解决修饰剂和修饰工艺中的关键技术，就能迅速地得到批准并投入应用。 早期的PEG修饰主要是采用线型的PEG与蛋白上的氨基交连完成的，由于蛋白上的氨基较多，这种修饰的位点往往是随机的，且可以是多价的。因而产物均一性差，药物质量控制较为困难。近年来发展的N-末端氨基定位修饰技术、巯基定位修饰和二硫键定位修饰技术则在一定程度上解决了这一问题(如左图)。PEG修饰可明显增加药物的水化半径，延长药物的血浆半衰期。目前，PEG修饰已经成为了长效蛋白研制的主要手段之一。由于PEG可以部分遮蔽活性位点，因而修饰后蛋白的体外比活性往往有较大下降。但由于其较长的体内半衰期，修饰蛋白的体内活性仍高于其前体蛋