慢病毒介导的GFP-Hsp90αE47A基因在HepG2细胞表达及对细胞增殖性影响的.pdfVIP

1643 现代生物医学进展 Progress in Modern Biomedicine Vol.11 NO.9 MAY.2011 · · 慢病毒介导的GFP-Hsp90αE47A 基因在HepG2 细胞表达及对 细胞增殖性影响的研究* # # △ 尹强兵 王晓捷 马晓姣 邹 飞 陈雪梅 （南方医科大学公共卫生与热带医学院职业卫生与职业医学系 广东广州510515） GFP-Hsp90αE47A , 摘要 目的：建立真核细胞表达的 基因重组慢病毒载体三质粒包装细胞系统并检测其对细胞增殖性的影响， HSP90 : (Hsp90 E47A/psin-GFP), 为进一步研究 分子伴侣功能奠定基础。方法：制备完整的重组慢病毒载体三质粒系统转移质粒 α 包装质粒(ΔNRF)及包膜蛋白质粒(VSV-G)。磷酸钙法将三质粒共转染293T 包装细胞,48 h 后收集病毒上清。将制备好的慢病毒 HepG2 , GFP , Western blot HepG2 GFP-Hsp90 MTT 颗粒感染 细胞在荧光显微镜下观察报告基因 的表达情况 检测 细胞 α 表达。 法 3 检测细胞增殖情况。结果：转染后的293T 和感染后的HepG2 细胞能观察到较强的绿色荧光，培养液上清病毒滴度约为3.0×10 ifu / l,HepG2 GFP-Hsp90 Hsp90 1.05 ± 0.15 P0.05 t μ 细胞中有 α 蛋白的表达。内源性 α 表达无明显上升（为对照组的 倍， ，检验）， 有明显外源性GFP-Hsp90αE47A 蛋白的表达，为对照组内源性Hsp90α 的0.68 ± 0.12 倍。外源性GFP-Hsp90αE47A 蛋白的表达 HepG2 4d (1.051±0.03 vs 1.349±0.05, P0.05 t ) 细胞增殖活性于第 有明显抑制。 ，检验 。结论：成功建立重组慢病毒载体的三质粒 包装细胞系统，并将GFP-Hsp90αE47A 基因在HepG2 细胞中稳定表达，且并未引起细胞明显的热休克反应而导致的内源性 Hsp90α 增高；且能明显抑制细胞增