核糖核酸酶抑制因子对h,2o,2损伤的大鼠神经胶质瘤细胞系c6的影响ribonuclease inhibitor of h, o 2, 2 damage of rat c6 glioma cell line.pdfVIP

核糖核酸酶抑制因子对H：O。损伤的大鼠 神经胶质瘤细胞系C6的影响 硕士研究生：潘东宁 指导教师：崔秀云教授 专业名称：生物化学与分子生物学 摘 要 核糖核酸酶抑制因子(ribonuc]easeinhibitor，RI)是广泛存 在于哺乳动物细胞浆中的一种酸性糖蛋白，以人胎盘中最为丰富。人 ribonuclease 胎盘RI(placental inhibitor，PRI)分子量约为 50kDa，一分子PRI中有32个半胱氨酸残基，其中至少30个半胱氨 酸的巯基以还原型巯基的形式存在，还原型巯基是保持RI活性的必要 因素。众所周知，生物体内还原型谷胱甘肽(reduced glutathione， GSH)通过其巯基可清除过氧化氢(H202)，防护脂质过氧化物造成 的损害，在机体抗氧化损伤方面发挥了重要的作用。根据R1分子组成 富含巯基的特点，拟通过一系列实验探求RI是否也具有抗氧化的功 能，并试图阐明其抗氧化机制。 6细胞及转染RI 一f实验以体外培养的大鼠神经胶质瘤c cDNA并且 RI过表达的C6(转C 6)细胞为研究对象，对比两者在过氧化氢 (H202)损伤条件下细胞形态、细胞存活率、LDH漏出量、MDA和 GSH含量的差别，以及两者抗氧化酶活性的差别。 结果显示： 1．细胞形态变化：在不同浓度的H202作用下，C6及转C6细胞肿 胀，胞体增大变圆，严重者细胞边界不清，形态不规则，胞浆透明，有 6细胞， 大片细胞脱落形成细胞脱失区。在相同H202浓度作用下的转C 细胞形态及分布较C6细胞明显改善。 6、转C6细胞的存活率 2．细胞存活率比较：随H202浓度增高，C 降低。同一损伤浓度下转C6细胞存活率高于C6细胞，H202浓度为 0．10 mmol／L，O．50 mmoI／L和1．00 mmol／L时，两者存在显著性差异 (p0．05)。 6、转C 6细胞的LDH漏出量、MDA和GSH含量均无显著性差异。以 1．00mmol／L H202作用后，转C6细胞的LDH漏出量、MDA含量显著低 于C 4．细胞抗氧化酶活性比较：C6、转C 6细胞的谷胱甘肽过氧化物酶 (GPx)活性在过氧化氢损伤前后均无显著性差异，过氧化氢酶(CAT) 和谷胱甘肽转硫酶(GST)活性则在过氧化氢损伤前和损伤后两种细胞之 6细胞的酶活性显著高于C 间有显著性差异，即转C 6细胞。 以上的实验数据表明砒具有减轻细胞过氧化损害的作用。这与根据 RJ分子富含巯基而推测其具有抗氧化功能的预想相符合，为今后研究Rj 乃至其他蛋白质的功能提供了新的思路。以体外细胞基因转染方法构建 的RJ过表达C6细胞作为研究的对象，是今后做转Iu基因抗氧化、Iu 基因治疗的实验基础。砒抗氧化机制除与其分子中多巯基有关外，Rj过 表达还引起细胞内CAT和GST活性增加。砒过表达对细胞核糖核酸酶 活性以及在mRNA水平Rj对抗氧化酶表达的影响还有待于进一步研究。r I 关键词： 核糖核酸酶抑制因子神经胶质瘤细胞系C6 过氧化