毕业论文--黄连、土大黄、苍术提取液抗银屑病实验研究.docVIP

黄连、土大黄、苍术提取液抗银屑病实验研究 【摘要】 ：目的 探讨中药黄连、土大黄、苍术提取液抗银屑病的作用机制。方法 采用体外细胞培养技术,选用人角质形成细胞株colo-16,观察黄连、土大黄、苍术单方及复方中药提取液对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)刺激前后人角质形成细胞增殖的影响。结果 黄连、土大黄、苍术单方及复方中药提取液在TNF-α刺激前后均表现出显著的抑制人角质形成细胞增殖的作用,与对照组甲氨喋呤和环孢素A相比较,差异有显著性意义(Plt;0.01)。结论 中药复方通过抑制人角质形成细胞的异常增殖对银屑病有治疗作用。 【关键词】 黄连　土大黄　苍术　角质形成细胞　银屑病　细胞培养 　　Abstract：Objective To study the mechanism of the extract of three kinds of Chinese herbs in treating psoriasis. Methods Three kinds of Chinese herbs (coptis root, patience dock root and atratylodes rhizome) were extracted. With the culture of human transformed keratinocyte cell line colo-16 cells as a model, the single and compound effects on the growth of KC were studied before and after stimulated by TNF-α. Results The single and compound extract of three Chinese herbs could restrain the proliferation of KC before and after stimulated by TNF-α. The effect was more remarkable than the compared methotrexate and cyclosporin A (Plt;0.01). Conclusions The three kinds of Chinese herbs can treat psoriasis by restraining the proliferation of KC. 　 Key words：coptis root；patience dock root；atratylodes rhizome；keratinocyte cell；psoriasis；cell culture 　　在银屑病表皮中多种细胞因子呈现高表达,能够刺激角质形成细胞(KC)发生银屑病样改变,其中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在银屑病的发病过程中起着重要的作用。本研究选用黄连、土大黄和苍术3味中药制成单味及复方中药提取液,采用体外细胞培养技术,观察单味及复方中药提取液对TNF-α刺激前后KC增殖的影响,探讨中药抗银屑病的作用机制。 　　1 实验材料 　　1.1 细胞株 　 人表皮鳞癌细胞株colo-16,购自北京师范大学。 　　1.2 主要试剂 　 重组人肿瘤坏死因子-α(rhTNF-α),购自PROMEGA公司,批号121CY25 G153。四氮唑蓝(MTT),美国Sigma公司生产。 　　1.3 药物 　　甲氨喋呤(MTX),上海华联制药有限公司生产,批号020805；氢化可的松琥珀酸钠,天津市生物化学制药厂生产,批环孢素A标准品(98.8%),购自中国药品生物制品检定所,批号0495-200202；中药饮片,经鉴定为《中华人民共和国药典》规定品种。 　　2 实验方法 　　2.1 中药提取液的制备 　　将药物粉碎,过20目筛,称取药物粉末30 g,加蒸馏水浸泡2 h,超声提取30 min,药液高速离心10 min,取上清液,蒸发浓缩为100%液,加2倍体积95%乙醇,充分混匀,放置48 h,过滤,于90 ℃水浴回流乙醇,得到100%的提取液,调pH值为8.0,抽滤去除沉淀,装入安瓿,密封后高温高压灭菌(10 mL/瓶)。 　　2.2 中药提取液对肿瘤坏死因子-α刺激前角质形成细胞增殖的影响 　培养的colo-16细胞生长接近单层时,消化后计数,以每孔100 μL(5×103个)接种于96孔板,于37 ℃、5%CO2培养箱培养。接种24 h后,显微镜下观察细胞已贴壁生长良好,达40%～50%融合,吸出各孔上清及未贴壁细胞。空白组标本数为7,其余各组标本数均为8,空白组仅加入DMEM培养液,氢化可的松组加药剂量为5 mg/L,环