多重耐药菌multidrug-resistantorganismmdro主要是指对临床.docVIP

多重耐药菌的实验室检测 近年来，国际上陆续报道“超级细菌”引起感染病例报道引发公众的极度关注，多重耐药菌也成为医院感染重要的病原菌。为此，卫生部发布《多重耐药菌医院感染预防与控制技术指南（试行）》，指导医疗机构通过强化多种耐药菌医院感染的管理，做好多重耐药菌所致感染的预防和控制。 　　《指南》要求医务人员合理使用抗菌药物，避免因药物使用不当导致细菌耐药的发生。要求临床微生物实验室至少每半年向全院公布一次临床常见分离细菌菌株及其药敏情况，定期向临床医师提供最新的抗菌药物敏感性总结报告和趋势分析，提高临床抗菌药物处方水平。 多重耐药菌（Multidrug-Resistant Organism,MDRO）,主要是指对临床使用的三类或三类以上抗菌药物同时呈现耐药的细菌。常见多重耐药菌包括耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）、耐万古霉素肠球菌（VRE）、产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）细菌、耐碳青霉烯类抗菌药物肠杆菌科细菌（CRE）（如产Ⅰ型新德里金属β-内酰胺酶[NDM-1]或产碳青霉烯酶[KPC]的肠杆菌科细菌等）、耐碳青霉烯类抗菌药物鲍曼不动杆菌（CR-AB）、多重耐药/泛耐药铜绿假单胞菌（MDR/PDR-PA）和多重耐药结核分枝杆菌。 临床微生物实验室耐药菌的监测工作，是多重耐药菌感染预防与控制工作的前提，因此，临床微生物室必须做好多重耐药菌检测试验的标准化工作，为临床多重耐药菌感染预防与控制提供准确的依据。现将2010年CLSI标准中有关MRSA、VRE、ESBLs、肠杆菌科细菌产碳青霉烯酶的检测标准发给各临床微生物实验室，仅供参考。 产NDM－1细菌的实验室诊断包括筛查、表型确认和基因确证三个步骤。 （一）表型筛查。 在细菌药物敏感性测定中，以美洛培南或亚胺培南纸片法（K－B法）或最低抑菌浓度（MIC）测定法对肠杆菌科细菌产酶情况进行初步筛查，如果达到以下标准，需要进行性表型确认。厄他培南特异性较低，不推荐用于筛查试验。 1.K－B法：美洛培南（10μg纸片）或亚胺培南（10μg纸片）抑菌圈直径≤22mm。 2.MIC测定法：美洛培南MIC≥2mg/L时；或亚胺培南对大肠埃希菌、克雷伯菌属、沙门菌属和肠杆菌属MIC≥2mg/L。 （二）表型确认 双纸片协同实验：采用亚胺培南（10μg）、EDTA（1500μg）两种纸片进行K－B法，两纸片距离10－15mm，在含EDTA纸片方向处，亚胺培南扩大，即可判定产金属酶。 采用亚胺培南（美洛培南）/EDTA复合纸片，进行K－B法药敏试验，复合纸片比单药纸片的抑菌圈直径增大值≥5mm；亚胺培南（美洛培南）/EDTA复合E试条协同实验测定MIC，单药与复合制剂的MIC比值≥8时，即可判定产金属酶。 （三）基因确证 采用NDM－1的基因特异引物进行PCR扩增及产物测序，确定菌株是否携带balNDM-1基因。 各医院对阳性结果须加以复核，同时将菌株送有条件的参考实验室进一步检测确证。