流感病毒中和抗体检测方法的建立及验证.pdfVIP

中国生物制品学杂志2014 年9 月第27 卷第9 期 Chin J Biologicals Sep 2014 ，Vol. 27 No. 9 · · 1199 ·技术方法 · 流感病毒中和抗体检测方法的建立及验证 赵慧 ，江征 ，李娟，刘书珍，邵铭 ，徐康维，李长贵 中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室，北京100050 摘要：目的 建立检测流感病毒中和抗体效价的微量病毒中和法（microneutralization tests ，MNT），并进行验证。方法 建立改进的微孔板病毒中和法，并对该方法的关键影响因素（不同代次MDCK 细胞和细胞培养板边缘效应）以及方 法的准确性和精密性进行验证；采用改进的微孔板病毒中和法和血凝抑制（hemagglutination inhibition ，HI）试验分别 检测甲型H1N1 流感疫苗免疫的血清样本85 人份，分析两种方法检测结果的相关性。结果 采用改进的微孔板病 毒中和法，用不同代次MDCK 细胞（25 、30、35 代）以及在细胞培养板不同位置（边缘孔、非边缘孔）检测相同的血清 样本的中和抗体滴度结果相同；该方法准确性和精密性良好；改进的微孔板病毒中和法和HI 法测定甲型H1N1 流 感疫苗免疫后血清抗体效价结果的相关系数为0. 81 ，表明两种方法的检测结果之间呈良好的正相关性。结论 建 立的微量病毒中和法可满足流感病毒中和抗体效价检测的要求，可用于评价疫苗的免疫效果。 关键词：流感病毒；中和抗体；微量病毒中和法；血凝抑制试验 中图分类号：R373.1 + 3 R392-33 文献标识码：A 文章编号：1004 5503 （2014）09 1199 04 - - - DOI:10.13200/ki.cjb.000536 Development and validation of microneutralization test for determination of neutralizing antibody against influenza virus ZHAO Hui，JIANG Zheng ，LI Juan ，LIU Shu-zhen ，SHAO Ming ，XU Kang-wei ，LI Chang-gui National Institutes for Food and Drug Control ，Beijing 100050 ，China， Corresponding author:LI Chang-gui ，E-mail: changguili@ Abstract ：Objective To develop and validate a microneutralization test （MNT）for determination of neutralizing antibody against influenza virus. Methods Modified MNT was developed ，of which the key influencing factors such as passage of MDCK cells and edge effect of various culture plates ，as well as accuracy and precision ，were verified. A total of 85 huma