人类脂肪来源成体干细胞体外培养的生物学特征研究-中国科学杂志社.pdfVIP

中国科学 C 辑:生命科学 2007 年 第37 卷 第2 期: 163~170 SCIENCE IN CHINA PRESS 人类脂肪来源成体干细胞体外培养的生物学特征 研究及供体年龄对其增殖的影响 * 雷 磊 廖威明 盛璞义 傅 明 何爱珊 黄 纲 ( 中山大学附属第一医院, 广州 510080) 摘要 通过研究人类脂肪组织来源成体干细胞(human adipose tissue derived adult stem cells, hADAS 细胞)体外培养的生物学特征及供体年龄对其生长增殖的影响, 为其作为组织工程学研究 和应用的种子细胞提供实验室研究基础. 取不同年龄组志愿者(20 岁、21~40 岁、41~60 岁和61 岁), 手术中切除少量皮下脂肪组织, 酶消化法分离细胞, 体外培养, 传至20 代. 取培养第3 代细 胞, 流式细胞仪检测细胞表面抗原标记物(CD29, CD34, CD44, CD45, CD49d, HLA-DR, CD106)和 细胞周期. 细胞培养传20 代后进行细胞染色体组分析. MTT 法分别检测各年龄组不同时间点吸 光值, 绘制生长曲线, 根据公式TD t lg 2 换算人类脂肪来源干细胞倍增时间(time doubling, lg lg Nt − N 0 TD). 结果显示: 酶消化法自皮下脂肪组织分离细胞, 体外培养 hADAS 细胞, 流式细胞仪检测示 CD29+, CD34−, CD44+, CD45−, CD49d±, HLA-DR, CD106−; G1 期占90%(P10 代); P20 细胞染色 体组分析显示为正常染色体, 未见异常染色体, 保持遗传稳定. 绘制细胞生长曲线, 20 年龄组 TD 为(11.22±0.73)h, 21~40 年龄组TD 为(11.14±0.76)h, 两组之间P 0.05, 无显著性差异; 41~60 年龄组TD 为(13.18±1.58)h , 61 年龄组TD 为(13.11±0.83)h, 两组之间P 0.05, 无显著性差异. 20 年龄组TD 与61 年龄组TD 显著性差异, P0.05. 说明hADAS 细胞可方便地取材于皮下脂 肪组织, 体外培养遗传特性稳定, 生长活跃, 青年组生长活性强于老年组, 可以作为组织工程学 种子细胞的新来源. 关键词 人类脂肪组织来源成体干细胞(hADAS 细胞) 供体年龄 细胞生物学 倍增生长时间 细胞增殖 目前, 很多研究结果显示, 组织工程为由于损伤 力, ( ⅱ) 长期生长活力, (ⅲ) 多向分化潜能的优势, 或者疾病造成的组织缺损的修复提供了一种有利的 是组织工程学研究中理想的种子细胞. 根据其来源 方法, 甚至可能会优于以往的任何一种方法. 其内涵 主要分为胚胎来源干细胞和成体干细胞 [3,4]. 在胚胎 则包括种子细胞. 生物学支架和细胞活性因子等三 发育过程中, 来源于胚胎的干细胞发育成身体各种 个因素, 而种子细胞是其核心内容 [1,2]. 目前, 越来越 成熟的组织器官 [5]. 根据文献报道, 人体在