代谢物酶法分析的设计要点.pdfVIP

第七节 代谢物酶法分析的设计要点 · · 　 451 第七节 代谢物酶法分析的设计要点 　 、 一 试剂酶的质量要求 ( ) 一 试剂酶的概念 。 , 试剂酶是指作为诊断试剂来测定化合物浓度或酶活性的一类酶 它是酶试剂的核心 它的 质量是酶试剂质量的决定性因素。 ( ) 二 试剂酶的来源和理化特征 。 , 临床生物化学酶试剂中的试剂酶主要来自动植物组织提取及微生物发酵工程 在早期 酶 ; , 、 、 多由含酶丰富的动植物组织提取 在当代 试剂酶除了脲酶 过氧化物酶 乳酸脱氢酶等分别由豆 、 , 。 类种子 辣根和心肌中提取外 则主要依赖微生物发酵工程 微生物发酵工程包括高产酶菌种的 , , , 。 , 筛选 但一旦形成规模生产后 能获得大量高纯度酶制品 从而能降低生产成本 近年来 基因重 , , , 组技术在酶生产上也有应用 活力高 杂酶含量少且价格低廉的重组酶蛋白已经面世 并己开应 用于临床生物化检验。 。 , 不同来源的同一种试剂酶有不同的理化特征 为了更有效地发挥工具酶的催化效能 形成 , 、 、 、 最佳的酶试剂配方 必须确切地掌握该酶对底物的专一性和相对分子质量 等电点 Km 最适 , , 、 。 pH 最适温度等理化特性参数 并熟悉辅助因子 激活剂和抑制剂对酶活性的影响 酶的分子量 由其肽链氨基酸种类和数量所决定。 , 、 Km 是酶的特征性常数 当反应温度 pH和离子种类及其 , 。 , 、 、 强度等因素不变时 Km 是一个定值 最适 pH不是酶的特征性常数 它因底物浓度 温度 缓冲 , 。 体系离子的种类和强度不同而有所变化 所以在提及酶的最适 pH时应说明它的测定条件 ( ) 三 试剂酶的纯度要求 。 不同的酶试剂系统对试剂酶的纯度有不同的要求 在以NADH的生成或减少作为指示反 , , 应的显色系统中 由于组织匀浆中往往含有 细胞色素 还原酶 它将消耗 而出